兔磷脂酶A1(PLA1)ELISA试剂盒免费代测
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点ELISA:与常规的微量板ELISA比较,Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点,而且结果可长期保存;但其也有不足,主要是在结果判定上比较主观,特不够高等。该的主要操作程序为:⑴载体膜的预处理及抗原包被 取纤维素膜用蒸馏水浸泡后,稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中,置37℃使纤维素膜干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40-53个样品,每个压圈可加抗原液1-20μl。⑵ 封闭 将纤维素膜置于封闭液中,37℃感作15-30分钟。封闭液多采用含有正常动物、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被检 可直接在抗原圈上加,也可剪下抗原圈、置于微量板孔中,再加入一定量适度稀释的待检,37℃反应一定时间,用洗涤液洗三次,每次1-3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶标,37℃反应一定时间后,用洗涤液洗三次。⑸显色 加入新鲜配制的底物液,37℃反应一定时间后,去掉底物液,加蒸馏水洗涤终止反应。⑹ 结果判定 以阳性、阴险作为对照,膜片出现深棕红色点者为阳性反应,否则为阴性反应。
实验原理:试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠4壬烯醛(4-HNE)捕获的包被微孔中,依次加入标本、品、HRP标记的检测,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的小鼠4壬烯醛(4-HNE)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
ELISA试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检剂盒、ELISA Kit、酶联试剂盒、酶联吸附测定试剂盒、酶联分析试剂盒、酶剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检剂盒、酶联吸附测定试剂盒等。
ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,全 科研工作者的认可及推崇,在欧美及很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。
Elisa生物试验是一种性高,特强,重复性好的实验诊断。由于其试剂、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在学检验的各领域中。ELISA检剂盒适用于体外定性检测人或中的抗人类(HEV) IgM ELISA检测。
ELISA检剂盒应用定性夹心检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,这些就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经 次孵育后,酶结合物就会与 次孵育结合上的HEV IgM相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa试剂盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
用途:
然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的才能充分发挥其学的优点。
产品特点:
一、、灵敏、特异的;
二、的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底度高的固相载体;
四、适用、、组织匀浆液、细胞上清液、等等多种标本类型;
五、节省实验经费。
elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为29.8mg/L,则认为回收率为99%。
辣根过氧化物酶:过氧化物酶(HRP)广泛分布于植物中,辣根中含,从辣根中提取的称辣根过氧化物酶(HRP),是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白(含糖量18%),分子量约40 000,约由300个酸组成,等电点为pH 3-9,催化反应的适pH值因供氢体不同而稍有差异,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的铵溶液。酶蛋白和辅基吸收光谱分别为275nm和403nm。
操作步骤:1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃。2. 设置品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;品孔各加不同浓度的品 50μL;3. 待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40μL;4. 随后品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测 50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。5. 弃去,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗 板 5 次(也可用洗板机洗板)。6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。7. 所有孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。