人碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2(PRB2)ELISA试剂盒

人碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2(PRB2)ELISA试剂盒

ELISA：本法主要用于检测型特。该现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测。下面以AP2型的ELISA检测法为例介绍其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加工作量1:4稀释被检猪100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加100μl工作量兔抗AP2型 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干⑤ 加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑦ 用ELISA检测仪测定OD值。本试验同时设阴、阳性对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。

操作注意事项：1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为 0 的品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作.5. 所有组分使用前充分摇匀。6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

自备材料

1）蒸馏水。

2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3）振荡器及磁力搅拌器等。



人碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2(PRB2)ELISA试剂盒

样品收集、处理及保存

1）-----操作中避免任何细胞。使用不含热原和内的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将和红细胞迅速小心地分离。

2）-----EDTA、柠檬酸盐、肝素可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4）组织匀浆-----将组织加入适量盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液

5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂盒性能

1. 灵敏度的检测浓度小于1号品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

结果判断与分析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的待测含量可根据其OD值由曲线换算出相应的浓度。

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

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