人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)ELISA试剂盒
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≥ 1盒¥2400.00
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)ELISA试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验(ELISA)。往预先包被白蛋白(ALB)的包被微孔中,依次加入标本、品、HRP标记的检测,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的白蛋白(ALB)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
计算:以物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出曲线,根据样品的OD值由曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用物的浓度与OD值计算出曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
结果判断: 绘制曲线:在Excel工作表中,以品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
样品收集、处理及保存
1. :使用不含热原和内的试管,操作中避免任何细胞,收集血液后,3000转离心10分钟将和红细胞迅速小心地分离。
2. :EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪(450nm)
2. 加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
免责声明:试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或生物体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担, 本公司概不负责。严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
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注:品(S0-S5)浓度依次为:0、6.25、12.5、25、50、100 mg/mL
试剂的
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板
1. 手工洗板:甩尽孔内,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置品孔和样本孔,品孔各加不同浓度的品50μL;
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制曲线:在Excel工作表中,以品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
双夹心ELISA:此法与双夹心ELISA的主要区别在于:它是采用酶标抗检查多种大分子抗原,它不仅不必标记每一种,还可试验的性。此法的基本程序为:① 加(Ab-1)包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 加待检抗原(Ag) → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特(Ab-2)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干④ 加入酶标抗Ab-2(AB-3)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。
试剂盒性能
1. 准确性:品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度检测浓度小于1.0 mg/mL。
3. 特:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。