鸡二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)ELISA试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

鸡二尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)ELISA试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被白蛋白（ALB）的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的白蛋白（ALB）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

上海笃玛生物科技有限公司ELISA试剂盒采用原装进口，一步孵育，一步洗板，操作时间仅需90分钟，就能准确的实验结果。刚开起的酶联板孔会含有少许水样，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响，您尽可放心使用。本司研发各种种属ELISA试剂盒：1、细胞因子检剂盒，如白介素、选择素、集落因子，坏死因子，素，转化生长因子，趋化因子，细胞因子受体，粘附分子，生长因子，凋亡因子等等；2、肝纤维化检测ELISA试剂盒，如纤维连接蛋白，质酸，胶原，基质金属蛋白酶因子，基质金属蛋白酶，层粘蛋白等等；3、检测ELISA试剂盒，如肌钙蛋白，肌红蛋白，C-反应蛋白等等；4、内检测ELISA试剂盒，如甲状腺,,性,,,,生长抑素,内皮素,皮质醇,骨钙素,催乳素,皮质,促素,，雌三醇，5-色胺，17-等等；5、自身检测ELISA试剂盒，如甲状腺,盐水可提取核抗原(ENA),抗核,DNA,抗心磷脂,类因子,循环复合物,抗胰岛细胞,胰蛋白酶原,Sm,大疱性类疱,蛋白酶,短膜虫法,肝-,肝--胃,肌内膜,角蛋白,抗核,抗核糖体蛋白,抗聚角蛋白微丝蛋白,抗链O,抗,抗肌,抗线粒体,抗心肌,抗组蛋白,粒细胞弹性蛋白酶,皮肤,小球基底膜,小球基底膜,髓过氧化物酶,条纹肌,网硬蛋白,胃壁细胞,胃蛋白酶,,性渗透性增强因子等等；6、标志物检测ELISA试剂盒，如标志物，组织多肽抗原，相关，细胞角蛋白片段，胃肠癌，铁蛋白，糖链抗原，神经特稀醇化酶，上皮膜抗原，，人抗小鼠，，甲胎蛋白，，，，大隐血检测，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等；7、优生优育检测ELISA试剂盒，如早,新生儿TSH,检测,抗心磷脂,抗带,抗带,抗,抗,巨细胞,弓形体,风疹,分娩,单核白细胞增多症,单纯疱疹,促素,促,便隐血,HCG等等；8、传染病检测ELISA试剂盒，如幽门螺杆菌,乙脑,,丙肝,丁肝,戊肝,庚肝,,,腺,微小B19,天疱,水-带状疱疹,生支原体,,沙眼,腮腺炎,人型支原体,,轮,,莱姆病,柯萨奇,抗解尿支原体,军团菌,结核,胶原,,甲肝,,急性炎尿胰蛋白酶,,呼吸道合胞,肝吸虫,副流感,肺炎,带状疱疹,传染性单核细胞增多症,层粘蛋白,布鲁氏杆菌,,,艾柯,EB,A族链球菌等等；9、特种蛋白检测ELISA试剂盒，如球蛋白,抗链O-aso,类因子RF,C反应蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,铁蛋白,转铁蛋白transferrin等等.

布ELISA：（C－ELISA）　C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大学者Blais,B. W.等于1989年建立的一种新型检测技术。该是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即涤纶布为固相载体，这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大，可为反应提供较大的表面积，反应的性，且容易洗涤，不需特殊仪器等优点。其基本原理与Dot-ELISA类似，只是载体不同。以对布氏杆菌抗原的检测为例，C－ELISA的主要程序为：⑴ 把抗布氏杆菌的包被（吸附）在聚脂布上，并经洗涤及封闭；⑵ 加被检样品并于室温下感作30分钟，然后洗5次；⑶ 加酶标记的抗布氏杆菌，于室温下感作30分钟，然后洗涤5次；⑷ 加入底物液显色；⑸ 测定OD值。

样品收集、处理及保存

1.  ：使用不含热原和内的试管，操作中避免任何细胞，收集血液后，3000转离心10分钟将和红细胞迅速小心地分离。

2.  ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作步骤：1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。2. 设置品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；品孔各加不同浓度的品 50μL；3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；4. 随后品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。5. 弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板 5 次（也可用洗板机洗板）。6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。7. 所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

鸡二尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)ELISA试剂盒

 

操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为0的S0号品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有组分使用前充分摇匀。

试剂的

 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板

1.  手工洗板：甩尽孔内，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

 

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置品孔和样本孔，品孔各加不同浓度的品50μL；

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

间接ELISA：本法主要用于检测。（DVH）的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；② DVH包被抗原、酶标抗、阴性及阳性DVH参考；待检鸭；③ ELISA检测仪、加样器、聚微量板。⑵ 步骤① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干③ 加酶标 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干④ 加底物液　→ 37℃ 30分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。⑶ 结果判定　已知阳性与已知阴性的比值（P/N）≥2.1，而且已知阳性的OD值≥0.4；在上述条件成立的情况下，如果待检与已知阴性的比值（P/N）≥2.1，而且待检的OD值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。

 

试剂盒性能

1.  准确性：品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度检测浓度小于1.0 mg/mL。

3.  特：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6个月

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。