牛游离前列腺特异性抗原(F-PSA)ELISA试剂盒

牛游离特抗原(F-PSA)ELISA试剂盒

酶联吸附法（ELISA）是一种灵敏、特异的学技术，常用于医学、生物领域中的抗原或检测。其操作步骤如下：1.包被：将抗原或与酶结合，形成酶标抗原或，并固定在固相载体上。2.洗涤：去除未结合的和杂质。3.封闭：加入封闭液，封闭固相载体上未结合的位点，以非特结合。4.洗涤：去除未结合的封闭液和杂质。5.加样：加入待检测的样本，使其与固相载体上的抗原或结合。6.洗涤：去除未结合的样本和杂质。7.加入酶标：使固相载体上的抗原或与酶标结合，将抗原或间接标记上酶。8.洗涤：去除未结合的酶标和杂质。9.显色：加入底物，使酶催化底物生成有色产物，根据颜色反应的程度进行抗原或的定性或定量检测。需要注意的是，具体的操作步骤可能因实验设计、试剂品牌等不同而有所差异。在进行ELISA实验时，应严格按照试剂盒说明书和实验指导手册进行操作，控制好实验条件和操作步骤，以实验结果的准确性和可靠性。

酶联吸附法（ELISA）的优点包括：1.高灵敏度：ELISA可以检测出微量的抗原或，其灵敏度通常比其他学更高。2.高特：ELISA仅与特定的抗原或结合，因此不易受到其他的，具有较高的特。3.快速：ELISA操作简便、快速，可以在短时间内结果.4.易操作：ELISA实验操作相对简单，易于化和自动化，因此适合于大规模样品的检测。5.应用范围广：ELISA可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、多肽、等，因此在医学、生物领域广泛应用。6.无放射性核素污染：与放射测定法相比，ELISA不需要使用放射性核素，因此更为安全、环保。总之，ELISA是一种高灵敏度、高特、快速、易操作的学技术，具有广泛的应用前景。

标记

良好的酶结合物取决于两个条件：即价的和高活性的酶。的活性和纯度对制备标记至关重要，因为特反应随活性和纯度的而增强。在酶标记中，的活性有所，故需要纯度高、效及抗原亲和力强的球蛋白使用亲和层析提纯的，可性，而且可稀释使用，非特吸附。

酶与交联，常用法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟 ， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室温放置30分钟后加入含5g纯化的水溶液1ml，混匀并装透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时（或过夜）使之结合，然后吸出，加（NaBH4）溶液（5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小时，将上述结合物混合液加入等体积饱和铵溶液，置4℃冰箱30分钟后离心，将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中，并对之透析过夜（4℃），次日离心除去不溶物，即酶标，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，进行测定后，冷冻干燥或低温保存。

牛游离特抗原(F-PSA)ELISA试剂盒

ELISA试剂盒用法

酶联吸附法（ELISA）在多个行业都有应用，特别是在医学和生物技术领域中了广泛应用。以下是一些应用ELISA的行业：1.医学诊断：ELISA被广泛应用于各种和等的诊断，如、、结核病等。在动物检疫方面，ELISA已为广泛采用的，例如用于诊断猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪、蓝舌病等。2.生物技术研发：ELISA可以用于检测生物分子，如蛋白质、多肽、等，在生物医学研究领域广泛应用。例如，在研发中，ELISA可以用于检测的生物活性、与靶点的结合情况等。3.食品安全检测：ELISA可以用于检测食品中的有害，如残留、兽药残留等，保障食品安全。4.监测：ELISA可以用于评估水质、空气等指标，监测状况。总之，酶联吸附法在医学、生物技术、食品安全和监测等领域都有广泛的应用价值。效果测定

测定内容包括酶和活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。

⑴ 酶与的活性　常用琼脂扩散或电泳法，使抗原与形成沉淀线，经PBS漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有活性。良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定是用系列稀释的酶标直接以ELISA进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标的使用浓度。

⑵ 结合物的定量测定　一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：

酶量（mg/ml）=OD403×0.42

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62

对于过碘酸钠氧化法制备的标记量，按下列公式计算：

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62

已知酶量和IgG量后，即可计算出标记的摩尔（mol）比值。

HRP/IgG摩尔比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4

结合物中酶总量=HRP（mg/ml）×结合物溶液量

结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×

用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果，达 1000(g/ml时效。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果，1.5-2.0。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%，达30%以上。

 

酶联吸附法（ELISA）的原理是利用抗原或与酶的结合，形成酶标抗原或，保持其活性，同时又保留酶的活性。将抗原或与酶连接成酶标记抗原或，它既保留了活性，又保留了酶的活性；在测定时，把受检标本(含待测或抗原)和酶标抗原或按一定程序与结合在固相载体表面的抗原或起反应形成固相化抗原-酶复合物，用洗涤的使固相载体上形成的抗原-酶复合物与其它成分分离，结合在固相载体上的酶量与标本中受检的量成一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被固相载体上的酶催化生为有色产物，通过定性或定量检测有色产物的量即可确定样品中待测的含量。

 

ELISA试剂盒的操作步骤如下：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤：弃包被液（拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。5.结合一抗：用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检，每孔100μl，要设立阴性对照，37℃孵育1.5h。6.洗涤：同上。7.结合酶标二抗：每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀释倍数根据产品不同有所不同，可按说明书进行）50μl，37℃孵育1h.8.洗涤：同上。9.显色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室温避光显色10min。10.待显色后，每孔加入50μl终止液（2mol/L H2SO4）终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值，以确定水平。以上步骤仅供参考，具体操作请根据实际情况和产品说明书进行。