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多维流式细胞术的发展新趋势——激光器的选择、优化和集成 

持续的病毒大流行进一步加速了个性化医疗的趋势,这一定程度上推动了用于研究和临床应用的更的流式细胞仪的发展。具体来说,所谓的多维流式细胞术需要引入更多激光波长来提供更大的数据集,以便在单个仪器中测量更多的细胞类型。
然而,这对于激光器厂商们则是一个挑战,他们不仅需要提供紫外线、可见光和近红外(near-IR)范围内的新波长可供选择,也需要对诸多单一波长的激光器进行整合和优化——多波长激光模块,以便于简化仪器制造商的后续生产和开发。
流式细胞术基础知识
流式细胞仪是一种可以计算血液样本中各种细胞类型数量的仪器。为了实现这一点,血液样本被浓缩,然后用多种荧光染料的混合物处理。每种荧光染料都能够和细胞表面的特定靶蛋白相结合,通过处理后的细胞会被放入流式细胞仪,通过一个喷嘴装置,使细胞被排成一列移动。
当细胞被输送到激光作用区后,一束或多束不同颜色的激光会聚焦在细胞上,每种荧光染料会在不同的波长被激发,产生与之对应的荧光和散射,仪器则会通过这种方式来识别各种细胞。
光学器件会收集荧光信号并使用带通滤波器将其分离到波长箱中,并使用检测器(光电倍增管或雪崩光电二极管)来定量测量光信号。
常规的流式细胞仪通常会含有多达四个激光波长和十个个检测器。新的仪器则会包含多达9个激光波长以及60个检测器。 两种仪器的效率都很高,通常每秒能够分析数百个细胞。
流式细胞仪简易原理
多维细胞术的挑战
荧光信号的波长总是比激光激发的波长要长(斯托克斯位移)。这种偏移允许使用带通滤波器和截止滤波器的组合有效地将荧光与散射激光分离。理轮上我们可以通过在激发曲线的峰值位置处去激发荧光染料,以此来达到大的信噪比。在多维流式细胞术的应用中,试剂组通常由多种荧光染料组成,这些荧光染料经过精心挑选,以确保它们都具有不同的激发和荧光光谱。这对于使仪器能够分离信号并由此确定每个细胞附着多少荧光染料至关重要,这反过来又使仪器能够明确的确定它是什么类型的细胞。


单频激光器 单频激光器,即单纵模激光器,它的特点是输出的激光模式既满足单横模又满足单纵模,其谐振腔内部只有单一纵模进行震荡,并且输出光强呈现高斯分布。除了激光本身良好的单色性和方向性外,单频激光器拥有普通激光器难以达到的相干长度长、谱线宽度窄的特点。在激光雷达、激光测距、激光遥感、激光医疗、光谱学、光频标准和非线性光学频率变换等领域中具有广泛的应用。 532nm 波长Wavelength (nm) 532±1 相干Coherent length (m) >50 输出功率 Output Power (W) 1,2,3,4,5 出光孔高度 Aperture Position (mm) 75.4 工作方式 Working Mode CW 尺寸 Dimensions (L×W×H, mm) 400 X 200 X 118.4 光斑模式Beam Mode 横模 Transverse TEM00 可配电源型号 Integrated Driver Model VD-I Series / VD-II Series 纵模 Longitude Single 制冷方式Cooling System 水冷 光束质量Beam Quality (M2 factor) <1.2 预热时间Warm-up Time (minutes) <15 光束发散角Beam Divergence (full angle, mrad)<1.5 工作温度Operation Temperature (℃) 20~30 光束直径Beam diameter at the aperture (1/e2, mm) <1.5 使用寿命Expected Lifetime (hours) >10000 线宽Spectral line width (nm) <0.00001 保修期Warranty Time 1 year

多波长激光模块
随着单个仪器中激光器数量的增加,光束对准的难度也会随之增加。每个激光束都在液流处聚焦并形成窄椭圆光斑。这确保了即使细胞不在液流的中心,它们仍然被相同数量的激光激发。所有椭圆光斑以微米级的空间精度在液流中单定位。
对于典型的四激光细胞仪,这意味着四套聚焦/整形光学器件和四套光束传输光学器件都在狭窄且拥挤的仪器空间内对齐。 此外,聚焦/对准需要能够免除频繁现场维护的高稳定性光路系统,这一切都带来了重大的设计和制造挑战。
针对这些挑战,新产业激光开发了一套多波长激光系统,可以将多达四个波长的激光器集成在一个紧凑型外壳内,实现共线或分离光束,从而大大减小这一挑战。这种集成化的激光模块简化了仪器设计和组装,并加快了仪器的上市时间。此外,它还能够通过消除电源和电控方面的冗余来降低系统成本。

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