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PCR实验室平面布局
PCR实验室原则为4个单的工作区域,由扩增前区到扩增后区,且要严格分开。实验材料、试剂、记录笔、纸、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂制备区-样品制备区—扩增区—扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流动到扩增后区,不得逆向流动。
各工作区域应设置缓冲间,工作间与缓冲间之间宜安装联锁装置。不同功能的核酸检验工作区应是分隔立的工作室,并有明显的标志,各区间不能直通。各区之间如果是紧密相连,需安装物品传递窗。每个工作区域的顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm。
实验室较为理想的布局模式为有一个走廊,试剂制备区,样品制备区,扩增区和产物分析区很规范的排列在一起。内实验室区域设为正压或常压状态,缓冲间内设为负压状态,使这三个区的空气流向由实验区域内向外,缓冲间内通向内实验室和走廊的门可安一种联锁装置,当一个门打开时,另一门关闭状态,防止出现两个门同时打开的情况。
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以各实验区的压力要求。
1、试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
2、标本制备区
该区域主要进行的操作为标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。
3、扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区) 的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区) 制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在轮扩增后打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样在本区内进行。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。
4、扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。
本区是主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
PCR实验室的空气流向严格按照试剂储存和准备区一标本制备区-扩增区-扩增产物分析区空气压力逐渐递减方式进行,防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。需要严格的通风设计,若通风设计不合理,会使风速流向混乱,甚至危害人们健康。