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艾德莱教学:确认RNA的质量好坏,跑电泳

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手把手教学:确认RNA的质量好坏,跑电泳(之一)。只有结合RNA电泳+OD值和OD比值才能判断。如果不跑电泳,只测OD值和比值是无法确定RNA的质量好坏的。因为,机器测OD吸光值值测的不仅仅是来源于RNA的吸光值,也包括残留杂质、残留蛋白、残留DNA的吸光值,甚至降解的RNA还会导致OD值升高(这叫核酸的增色效应)。这些吸光值都会导致OD测量值的虚高。造成误认为RNA浓度高,其实却是残留了蛋白,DNA,杂质,和/或者降解的RNA。下面举一例:已经完全降解的RNA,OD测量值和比值却基本正常,还显示浓度高(实际是降解的RNA因为核酸增色效应导致吸光值升高,从而造成浓度的虚高),不跑电泳,完全没法知道这个RNA已经降解了,不能用了。


手把手教学:确认RNA的质量好坏,跑电泳(之二)。只有结合RNA电泳+OD值和OD比值才能判断。如果不跑电泳,只测OD值和比值是无法确定RNA的质量好坏的。因为,机器测OD吸光值值测的不仅仅是来源于RNA的吸光值,也包括残留杂质、残留蛋白、残留DNA的吸光值,甚至降解的RNA还会导致OD值升高(这叫核酸的增色效应)。这些吸光值都会导致OD测量值的虚高。造成误认为RNA浓度高,其实却是残留了蛋白,DNA,杂质,和/或者降解的RNA。下面再举一例:已经电泳完全降解的RNA,OD测量值和比值却基本正常,还显示浓度高(实际是降解的RNA因为核酸增色效应导致吸光值升高,从而造成浓度的虚高),不跑电泳,完全没法知道这个RNA已经降解了,不能用了。


手把手教学:确认RNA的质量好坏,跑电泳(之三)。只有结合RNA电泳+OD值和OD比值才能判断。如果不跑电泳,只测OD值和比值是无法确定RNA的质量好坏的。因为,机器测OD吸光值测的不仅仅是来源于RNA的吸光值,也包括残留杂质、残留蛋白、残留DNA的吸光值,甚至降解的RNA还会导致OD值升高(这叫核酸的增色效应)。这些吸光值都会导致OD测量值的虚高。造成误认为RNA浓度高,其实却是残留了蛋白,DNA,杂质,和/或者降解的RNA。下面再举一例:Trizol提取玉米胚乳RNA,提取的RNA含有大量杂质的RNA/并且有部分降解的RNA,OD测量值和比值却和我们试剂盒提取基本相同,但是跑电泳,发现实际浓度亮度不到我们试剂盒提取的一半,说明测量吸光值的一半以上来源于杂质的吸光值,或者降解的小片段RNA的吸光值。做下游荧光定量检测,Trizol提取的玉米胚乳RNA,含有大量杂质和降解RNA,CT值比试剂盒提取的晚了4-6个CT值。不跑电泳,他们的OD值和比值却基本一致,只测OD值根本发现不了。

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