ECV-304人脐静脉内皮细胞株

ECV-304人脐静脉内皮细胞株
细胞编号： C0306
细胞缩写： ECV-304细胞
细胞名称： ECV-304(人脐静脉内皮细胞)
T25培养瓶发货形式是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T25培养瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态（有条件可以拍下此时细胞照片）。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。将T25中培养基取出装好备用，如细胞密度80%，可以直接消化传代，相反则加入5-6ml培养基放回培养箱继续培养即可。背景资料： ECV-304细胞本身为人脐静脉内皮细胞，可用于脐静脉内皮损伤修复的研究，但是经检测证明该细胞已经被膀胱癌细胞污染。
细胞来源： 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外大学建系
"购买细胞注意事项：
1. 收到细胞后观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。" P4
包装规格： 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
细胞规格： 1*10(5)/ml——1*10（6）/ml
离心管发货形式是用15ml离心管发货的形式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。将T25中培养基取出装好备用(如果实验室没有T25培养瓶，可以暂时T75 培养瓶，加入10-15ml培养基,，建议10ml培养基，也可以使用T175 培养瓶，加入50-60ml培养基，培养瓶越大，需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话，一般不用大瓶子，先用小瓶子养起来再换大的，不然会长得很慢，严重的，会导致细胞死亡等危险)，平衡完成后，离心（1000rpm，3min）收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。生物安全级别： 1
细胞种属： 人
上海黄浦组织来源： 脐静脉
细胞形态： 上皮细胞样
T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm，5min）后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。 贴壁
细胞融合度： 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion），冻存液中含有DMSO请使用细胞级DMSO，同时浓度不要太高，部分细胞在10%DMSO条件下冻存会死亡，所以DMSO浓度5%-8%是比较推荐的浓度。细胞冻存及复苏遵循慢冻快融的原则，即取0.2-0.3ml的冻存液重悬的细胞于一个冻存管中，与正常体积冻存的细胞共同冻存，至液氮后复苏检查冻存结果。冻检合格前，留一部分细胞继续培养，以防万一。
细胞检测： 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
"细胞培养三不要：
养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：
1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）
其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更，超净台内根本就不点酒精灯。
2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，特别是对原代细胞或是磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。
3. 不要怕消化。在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。" 选择此细胞合适的培养基(DMEM低糖、DMEM高糖、RPMI-1640、McCoy's 5A等培养基)89%和10%PBS及1%双抗(防止污染)或者此细胞的完全培养基或者此细胞的培养基；生长条件：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃(模拟人体正常温度培养，这也是体外培养合适的温度)
传代比例建议1:2-1:3，长得比较快的细胞可以1:3，比较慢的按1:2传代。传代后，建议不要使用传代前培养所使用的培养基，会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险。细胞状态不好或者生长极慢的时候，可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。请不要随意更换培养基，因实验需要，可以逐步驯化(让它们慢慢适应)。传代方法： 建议1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件： 详见细胞说明书
冻存液配方：建议使用92%PBS+8%DMSO，客户自身实验室所使用的冻存液也可以适用，血清浓度不低于30%，DSMO含量不12%即可。细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5%CO2，湿度环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件；细胞于培养瓶或皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基（一般液面高度2-3mm即可）。主要文献： "请具体查阅相关发表文章，接收细胞相关问题：如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25及离心管发货的细胞将可以消毒后在37度过夜，血清发货的细胞在室温下静置1-2天（注意不要放冰箱），干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升华，请即刻复苏细胞。
T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm，5min）后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（1000rpm，3min）收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。"