人血管性血友病因子裂解蛋白酶(VWFCP/ADAMTS13)ELISA试剂盒

人血管性血友病因子裂解蛋白酶(VWFCP/ADAMTS13)ELISA试剂盒

ELISA：本法主要用于检测IgM。由于IgM出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种的早期诊断。ELISA根据所用标记不同可分为标记抗原、标记、标记抗ELISA等几种，其中以标记抗原ELISA比较有代表性，该的主要程序为：① 用抗u链（抗IgM重链）包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

操作步骤：1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。2. 设置品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；品孔各加不同浓度的品 50μL；3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；4. 随后品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。5. 弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板 5 次（也可用洗板机洗板）。6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。7. 所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

自备材料

1）蒸馏水。

2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3）振荡器及磁力搅拌器等。



人血管性血友病因子裂解蛋白酶(VWFCP/ADAMTS13)ELISA试剂盒

样品收集、处理及保存

1）-----操作中避免任何细胞。使用不含热原和内的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将和红细胞迅速小心地分离。

2）-----EDTA、柠檬酸盐、肝素可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4）组织匀浆-----将组织加入适量盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液

5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂盒性能

1. 灵敏度的检测浓度小于1号品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

结果判断与分析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的待测含量可根据其OD值由曲线换算出相应的浓度。

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

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