乙酰辅酶A试剂盒微量法

乙酰辅酶A试剂盒微量法说明书

微量法 100管/96样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

商品属性：

产品名称：乙酰辅酶A试剂盒微量法

货号：LZ-S01146

规格 : 100管/96样

测试方法:微量法

产品分类：三羧酸循环系列

发货地：上海

测定意义:

乙酰辅酶A广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于ATP合成。此外，乙酰辅酶A是合成脂肪酸，酮体，胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。

测定原理:

苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶A含量和NADH的生成速率成正比，340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A含量的高低。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 250μL 试剂五充分溶解备用；用不完的试剂分

装后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂三：液体 10uL×1 支，4℃保存。临用前加入 250μL 试剂五充分溶解备用；用不完的试

剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存。临用前加入 22.5mL 试剂五充分溶解备用；用不完的试剂

分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂五：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。

工作液的配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.23 m L），将试剂二、三和四

按照 1:1:90 的比例混合，或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀（可以测定 96 样）；

加样前置 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴锅中预热 30 min；现配现用；

乙酰辅酶 A 的提取

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

生化检测试剂盒操作步骤：

一、‌准备工具和环境‌：确保操作台面干净、整洁，这是进行科学实验的步。杭州

‌二、‌仔细阅读说明书‌：这是使用试剂盒的基础，说明书包含了所有必要的信息和操作指南。

三、样本采集‌：按照说明书的指导，正确采集样本。不同类型的检测可能需要不同类型的样本，如血液、唾液或鼻涕等。

‌四、样本混合‌：将样本与试剂小心混合，注意轻柔操作，避免产生泡沫，以确保检测的准确性。

‌五、‌等待反应‌：混合后，耐心等待试剂盒的反应，这个时间可以用来进行其他活动，但不要着急，因为好的结果值得等待。

六、结果判读‌：时间到后，仔细判读结果。试剂盒通常会有明确的指示，告诉你如何根据显示的线条或颜色来判断结果。

公司正在出售的产品：

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注意事项:

①加入试剂的顺序应一致,以所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。