牛可溶性尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(suPAR)ELISA试剂盒

牛可溶性尿激酶型纤溶酶原因子受体(suPAR)ELISA试剂盒

ELISA试剂盒用法

酶免ELISA试剂盒是一种常用的学实验技术，常用于抗原或的定量检测。这种试剂盒利用酶联吸附法（ELISA）技术，将已知的抗原或吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。ELISA试剂盒具有高灵敏度、高特、快速、易操作等优点，在医学、生物学和化学等领域广泛应用。

标记

良好的酶结合物取决于两个条件：即价的和高活性的酶。的活性和纯度对制备标记至关重要，因为特反应随活性和纯度的而增强。在酶标记中，的活性有所，故需要纯度高、效及抗原亲和力强的球蛋白使用亲和层析提纯的，可性，而且可稀释使用，非特吸附。

酶与交联，常用法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟 ， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室温放置30分钟后加入含5g纯化的水溶液1ml，混匀并装透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时（或过夜）使之结合，然后吸出，加（NaBH4）溶液（5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小时，将上述结合物混合液加入等体积饱和铵溶液，置4℃冰箱30分钟后离心，将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中，并对之透析过夜（4℃），次日离心除去不溶物，即酶标，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，进行测定后，冷冻干燥或低温保存。

牛可溶性尿激酶型纤溶酶原因子受体(suPAR)ELISA试剂盒

ELISA试剂盒的操作步骤如下：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤：弃包被液（拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。5.结合一抗：用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检，每孔100μl，要设立阴性对照，37℃孵育1.5h。6.洗涤：同上。7.结合酶标二抗：每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP（稀释倍数根据产品不同有所不同，可按说明书进行）50μl，37℃孵育1h.8.洗涤：同上。9.显色：每孔加底物溶液（TMB）50μl，置室温避光显色10min。10.待显色后，每孔加入50μl终止液（2mol/L H2SO4）终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值，以确定水平。以上步骤仅供参考，具体操作请根据实际情况和产品说明书进行。

酶联吸附法（ELISA）的原理是利用抗原或与酶的结合，形成酶标抗原或，保持其活性，同时又保留酶的活性。将抗原或与酶连接成酶标记抗原或，它既保留了活性，又保留了酶的活性；在测定时，把受检标本(含待测或抗原)和酶标抗原或按一定程序与结合在固相载体表面的抗原或起反应形成固相化抗原-酶复合物，用洗涤的使固相载体上形成的抗原-酶复合物与其它成分分离，结合在固相载体上的酶量与标本中受检的量成一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被固相载体上的酶催化生为有色产物，通过定性或定量检测有色产物的量即可确定样品中待测的含量。效果测定

测定内容包括酶和活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。

⑴ 酶与的活性　常用琼脂扩散或电泳法，使抗原与形成沉淀线，经PBS漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有活性。良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定是用系列稀释的酶标直接以ELISA进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标的使用浓度。

⑵ 结合物的定量测定　一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：

酶量（mg/ml）=OD403×0.42

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62

对于过碘酸钠氧化法制备的标记量，按下列公式计算：

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62

已知酶量和IgG量后，即可计算出标记的摩尔（mol）比值。

HRP/IgG摩尔比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4

结合物中酶总量=HRP（mg/ml）×结合物溶液量

结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×

用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果，达 1000(g/ml时效。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果，1.5-2.0。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%，达30%以上。

 

90分钟一步法ELISA试剂盒可以适用于、、组织匀浆、细胞上清液等样本类型。这些样本可以用于检测、和其他微生物等病原体，以及、自身性等病理情况。同时，ELISA试剂盒还可以用于检测浓度、维生素等营养，以及污染物等有害的残留量。需要注意的是，不同样本类型和检测项目可能对ELISA试剂盒的灵敏度和特产生影响，因此在选择使用ELISA试剂盒时需要根据具体情况进行选择。

 

ELISA试剂盒基于抗原之间的特异结合反应，以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原，而则为纯化抗原动物后的多克隆和使用杂交瘤技术的单克隆，而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成制备。ELISA试剂盒的作用ELISA试剂盒是一种用于体外定性检测人或中的特定的试剂盒，例如抗人类戊型（HEV）IgMELISA检剂盒。ELISA试剂盒具有灵敏度高、特好、操作简便、安全、快速等优点，可以用于检测类因子、、等，在临床诊断、科研和生物制品检测等领域具有广泛的应用。