叉头框蛋白01试剂盒

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

60 ng/L5 号标准品150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

30 ng/L4 号标准品150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

15 ng/L3 号标准品150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

7.5 ng/L2 号标准品150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

3.75 ng/L1 号标准品150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，

然后再加待测样品 10µl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中类重组ph20(spam1)水平。用纯化的类重组ph20(spam1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入类重组ph20(spam1)，再与HRP 标记的类重组ph20(spam1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的类重组ph20(spam1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中人类重组ph20(spam1)浓度。

试剂盒组成：

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 ; 2 酶标试剂 6ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条 ; 4 样品稀释液 6ml×1 瓶

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 ; 6 显色剂B 液 6ml×1/瓶

7 终止液 6ml×1 瓶; 8 标准品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶; 10 说明书 1 份

11 封板膜 2 张; 12 密封袋 1 个

标本要求

1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)活性。

影响ELISA试剂盒实验的因素
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性;
2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。
二、试验仪器
1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低;
2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。
三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低;
2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;
3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性;
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
5、抗原与抗体反应达到完全平衡，依赖于温度与时间。温度45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。

区分ELISA试剂盒的方法：
一：选定一个检测范围内的浓度做多孔重复，可看出平行性好不好。即板内CV值的大小，此操作时需求当心加样的性。对一些制造较粗糙的试剂盒来说，板间CV值是较大的。
二：可选用已知浓度的重组细胞因子，稀释到检测范围内作为样本参加，看检测的性。
三：对用待测目标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的小浓度稀释，可测出灵敏度，主张5个复孔以上才有含义。一般厂家以20个复孔做出的成果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述，也可判别出所购试剂盒是否有夸张之说。
四：如果有相同目标的试剂盒，可用对方的标准品作为样本，分别参加各自的试剂盒做检测，以检测试剂盒的真实性，性。如其中一种是的，比较牢靠的话，可作为标准来验证另一试剂盒的程度。
ELISA试剂盒的特点：
1、采用全进口原料和抗体-、灵敏、特异，严格运用国际生产标准进行 批量生产;
2、规范包被操作-吸附均匀，吸附性好，空白值低，孔底透明度高;
3、的优化方案-重复性高，可靠性强;
4、购买本公司的ELISA试剂盒，免费代测;
5.产品现货充足，发货及时;
6、技术服务：，及时，耐心;
7、适用于血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本;
8、可检测动物类型丰富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、鸡 、虾、鱼等;
9、可检测指标：炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长 因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等;
10、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，的科研队伍，的实验设备 、准确可靠的实验结果，是您实验合作;
elisa试剂盒是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。