牛T细胞活化连接蛋白(LAT)ELISA试剂盒
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≥ 1盒¥2400.00
牛T细胞活化连接蛋白(LAT)ELISA试剂盒
ELISA试剂盒的用法包括以下步骤:1.包被:用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml,酶标板中每孔加入50μl,室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤:弃包被液(拍干,再用无尘纸吸干),用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次(每孔均要加满),每次3min~5min。3.封闭:每孔加封闭液(1%BSA)250μl,37℃封闭2h。4.洗涤:用1×PBST洗涤液洗板3次,每次3min~5min。5.加样:加入已经稀释好的样品,37℃反应1h。一般样本加入50-100μl,充分混匀。6.洗涤:用洗涤液洗板3次,每次3min~5min。7.加入酶标试剂:每孔加入100μl酶标溶液,37℃,1h。8.洗涤:用洗涤液洗板3次,每次3min~5min。9.显色:每孔先加入显色剂A液50μl,再加入显色剂B液50μl,37℃避光10-15min。10.终止及测定:加入50μl终止液,终止反应,用酶标仪在450nm波长处测OD值。
酶免ELISA试剂盒是一种常用的学实验技术,常用于抗原或的定量检测。这种试剂盒利用酶联吸附法(ELISA)技术,将已知的抗原或吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。ELISA试剂盒具有高灵敏度、高特、快速、易操作等优点,在医学、生物学和化学等领域广泛应用。
标记
良好的酶结合物取决于两个条件:即价的和高活性的酶。的活性和纯度对制备标记至关重要,因为特反应随活性和纯度的而增强。在酶标记中,的活性有所,故需要纯度高、效及抗原亲和力强的球蛋白使用亲和层析提纯的,可性,而且可稀释使用,非特吸附。
酶与交联,常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记的改良过碘酸钠法简单易行,标记效果好,特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为:将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中,加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠(NaIO4)水溶液0.5ml,混匀置4℃冰箱30分钟 , 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,室温放置30分钟后加入含5g纯化的水溶液1ml,混匀并装透析袋,以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时(或过夜)使之结合,然后吸出,加(NaBH4)溶液(5(g/ml)0.2ml,置4℃冰箱2小时,将上述结合物混合液加入等体积饱和铵溶液,置4℃冰箱30分钟后离心,将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中,并对之透析过夜(4℃),次日离心除去不溶物,即酶标,用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml,进行测定后,冷冻干燥或低温保存。
牛T细胞活化连接蛋白(LAT)ELISA试剂盒
ELISA测定结果如何计算.ELISA测定结果计算如下:1.计算阴性对照A值的平均数(NCX )和阳性对照A值的平均数(PCX)。2.两个平均数的差(P-N)大于一个特定的数值,例如0.400,试验才有效。3.3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范围,则弃去,而已另两个阴性对照重新计算NCX;如有两个阴性对照A值超出以上范围,则该次实验无效。4.阳性判定值按下式计算:阳性判定值=NCX+0.05。5.标本A值>阳性判定值的为阳性,小于阳性判定值的为阴性。需要注意的是,试剂盒的常数只适合于该特定条件下,而不是对各种试剂均可通用。