鸡α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒

鸡α素(IFN-α)ELISA试剂盒 

试剂盒性能

1. 特高：由于是抗原的特结合，因此试验的特很高，能够排除其他的。

2. 灵敏度高：由于酶的放大作用，使得试验的灵敏度大大，能够检测出微量的抗原或。

3. 操作简便：ELISA试验操作相对简单，容易，适合于大规模样本检测。

4. 适用范围广：可以用于检测各种抗原、和等生物分子。

  

样品收集、处理及保存

1. ：使用不含热原和内的试管，操作中避免任何细胞，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将和红细胞迅速小心地分离。

2. ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

 标记：良好的酶结合物取决于两个条件：即价的和高活性的酶。的活性和纯度对制备标记至关重要，因为特反应随活性和纯度的而增强。在酶标记中，的活性有所，故需要纯度高、效及抗原亲和力强的球蛋白使用亲和层析提纯的，可性，而且可稀释使用，非特吸附。

实验原理

      试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被相关指标的的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

 

 

 

 鸡α素(IFN-α)ELISA试剂盒

 

操作步骤

 

1)涂层:微孔板的孔涂上捕获或抗原。

2)封闭:孔内加入封闭剂(如牛白蛋白或羧纤维素)，非特蛋

白质结合。

3)样本添加:加入含有未知浓度的目标抗原或的样本。

4)洗涤:去除未结合的。

5)检测添加:加入对特定抗原有特的酶标记检测。

6) 再次洗涤:再次去除未结合的检测。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物产生颜色变化。

8)终止反应:加入终止溶液停止酶的反应(在某些类型的ELISA中需要)。

9) 读数:使用光谱光度计测定每个孔的吸光度(通常是在特定波长下)，吸光度

与样本中抗原或的浓度成正比。

 

 

自从Engvall和Perlman(1971）报道建立酶联吸附试验（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以来，由于ELISA具有快速、、简便、易于化等优点，使其迅速的发展和广泛应用。尽管早期的ELISA由于特不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆进行ELISA试验，都大大了ELISA的特，加之电脑化程度的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便实用和化，从而使其成为广泛应用的检测之一。如今ELISA已被广泛应用于多种和等的诊断。在动物检疫方面，ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的。

标本的采集及保存

1.：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

2.：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

3.细胞物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。) 

 

 

 

结果分析

根据试剂盒提供的品浓度及对应的OD值，利用品绘制的曲线，计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理，通过计算待测样品的浓度。

 

 

 

 

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

结果判断： 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。