羟脯氨酸(HYP)活性试剂盒羟脯氨酸(HYP)含量试剂盒

羟脯氨酸含量试剂盒

测定意义：

HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

测定原理：

样品经水解产生游离的HYP，进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。

注    意：
正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

自备实验用品及仪器：

天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、6mol/L盐酸和蒸馏水。

羟脯氨酸提取：

1.组织：称取约0.2g样品于玻璃管，加入2mL的组织提取液，置于110℃烘箱，水解6至12小时，用提取液定容至2mL，12000g，25℃，离心20min，取上清待测。

2.细胞：取约500万个细胞，加入1mL的细胞提取液，于高压消毒器中15磅保持30min，自然降压后待测。

3.血清游离羟脯氨酸提取：取0.1mL血清，加入0.5mL无水使蛋白质沉淀，8000g4℃离心5min。将上清倒入另一个EP管，氮吹或沸水浴将挥发干。冷却后再加入0.2mL50%充分溶解混匀待测。

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