泥鳅在底泥中或水的底层淤泥中活动，且喜昼伏夜出，长期在黑暗环境使其视力退化。但触须、侧线等却十分敏感，在避敌和觅食活动中起到关键作用。
泥鳅是杂食性鱼类，体长5厘米以下的鳅苗主要摄食动物性饵料，如轮虫、枝角类、桡足类等浮游动物，体长在5-8厘米时，除了摄食小型甲壳动物、昆虫幼虫、水蚯蚓外，还摄食高等水生植物、藻类和有机碎屑等，以后逐渐变为杂食性鱼类，几乎无所不食，凡水中和泥中的动植物及有机碎屑，都是泥鳅的天然饵料。
由于泥鳅取食广泛，所以与其他鱼类混养往往能起到“清洁工”的作用。泥鳅白天大多潜伏在泥中，喜上半夜外出觅食，如果环境安静，有时白天也出来活动。