EM-2内吗啡肽-2ELISA试剂盒

EM-2内吗啡肽-2ELISA试剂盒

我司提供的试剂仅供研究使用       

实验目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中EM-2内吗啡肽-2的含量。

实验原理：

上海试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被EM-2内吗啡肽-2的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中EM-2内吗啡肽-2呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度

试剂盒组成：

操作步骤：

内吗啡肽-2试剂盒方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M0.05ml。

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　内吗啡肽-2ELISA方法二　用于检测未知抗体的间接法：　　　

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

注意事项：

1.　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

2.　在酶联ELISA试剂盒中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

(1)　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

　　（2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。

(3)　酶标记抗体工作浓度的选择：用直接ELISA检测试剂盒法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4)　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

公司正在出售的产品：

SAA4重组人 SAA4 蛋白 (GST 标签) Protein

组蛋白H4抗体

小鼠抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)ELISA检测试剂盒MouseAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 96T/48T

CTSB Protein Mouse 重组小鼠 Cathepsin B / CTSB 蛋白 (His 标签)

AGA重组人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 蛋白 (His 标签) Protein

HGF Protein Canine 重组狗 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白

IL2重组人 IL2 / Interleukin-2 蛋白 (L35M, L36S, C142A) Protein

HumanBcellactivationfactorrfromthetumornecrosisfactorfamilyreceptor,BAFF-RELISAKit人B细胞活化因子受体(BAFF-R)ELISA试剂盒规格：96T/48T

小鼠抗心1脂抗体IgM(ACA-IgM)试剂盒 Mouse ai-cardiolipin aibody IgM,ACA-IgM ELISA Kit

英文名称HumanBone-specificAlkphase-BELISAKit人骨特异性碱性1酸酶(ALP-B)规格：96T/48T

神经网蛋白CopineVI抗体

SCARB2 Protein Mouse 重组小鼠 LIMP-2 / SCARB2 / CD36L2 蛋白 (His 标签)

PIN1重组人 PIN1 / Rotamase Pin1 蛋白 (His 标签) Protein

去整合素样金属蛋白酶15抗体

化成骨特异性转录因子抗体

F3 Protein Rat 重组大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 (His 标签)

犬透明质酸酶4(HAase 4)试剂盒 Canine Hyaluronidase 4,HAase 4 ELISA Kit

人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA 试剂盒 96T/48T

凝血酶激活肽1抗体  Anti-Thrombin Activation peptide fragment 1  WB IHC-P IHC-F IF  100ul

RIPA裂解液（强）  进口/国产

NADH脱氢酶黄素蛋白1抗体

兔子雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒rabbitEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T

HumanCyclin-dependekinase2,CDK-2ELISAKit人周期素依赖性激酶2(CDK-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T

EM-2内吗啡肽-2ELISA试剂盒巢蛋白1抗体