牛血管活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA试剂盒

牛血管活性肽酶剂(VPI)ELISA试剂盒 

试剂盒性能

1. 特高：由于是抗原的特结合，因此试验的特很高，能够排除其他的。

2. 灵敏度高：由于酶的放大作用，使得试验的灵敏度大大，能够检测出微量的抗原或。

3. 操作简便：ELISA试验操作相对简单，容易，适合于大规模样本检测。

4. 适用范围广：可以用于检测各种抗原、和等生物分子。

  

样品收集、处理及保存

1. ：使用不含热原和内的试管，操作中避免任何细胞，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将和红细胞迅速小心地分离。

2. ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

 操作注意事项：1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为 0 的品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作.5. 所有组分使用前充分摇匀。6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

实验原理

      试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被相关指标的的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

 

 

 

 牛血管活性肽酶剂(VPI)ELISA试剂盒

 

操作步骤

 

1)涂层:微孔板的孔涂上捕获或抗原。

2)封闭:孔内加入封闭剂(如牛白蛋白或羧纤维素)，非特蛋

白质结合。

3)样本添加:加入含有未知浓度的目标抗原或的样本。

4)洗涤:去除未结合的。

5)检测添加:加入对特定抗原有特的酶标记检测。

6) 再次洗涤:再次去除未结合的检测。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物产生颜色变化。

8)终止反应:加入终止溶液停止酶的反应(在某些类型的ELISA中需要)。

9) 读数:使用光谱光度计测定每个孔的吸光度(通常是在特定波长下)，吸光度

与样本中抗原或的浓度成正比。

 

 

本试剂盒采用双夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被捕获的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。

标本的采集及保存

1.：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

2.：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

3.细胞物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。) 

 

 

 

结果分析

根据试剂盒提供的品浓度及对应的OD值，利用品绘制的曲线，计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理，通过计算待测样品的浓度。

 

 

 

 

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

ELISA：本法主要用于检测IgM。由于IgM出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种的早期诊断。ELISA根据所用标记不同可分为标记抗原、标记、标记抗ELISA等几种，其中以标记抗原ELISA比较有代表性，该的主要程序为：① 用抗u链（抗IgM重链）包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。