豚鼠核孔蛋白107kda(NUP107)ELISA试剂盒
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豚鼠核孔蛋白107kda(NUP107)ELISA试剂盒
酶联吸附法(ELISA)的原理是利用抗原或与酶的结合,形成酶标抗原或,保持其活性,同时又保留酶的活性。将抗原或与酶连接成酶标记抗原或,它既保留了活性,又保留了酶的活性;在测定时,把受检标本(含待测或抗原)和酶标抗原或按一定程序与结合在固相载体表面的抗原或起反应形成固相化抗原-酶复合物,用洗涤的使固相载体上形成的抗原-酶复合物与其它成分分离,结合在固相载体上的酶量与标本中受检的量成一定的比例,加入酶反应的底物后,底物被固相载体上的酶催化生为有色产物,通过定性或定量检测有色产物的量即可确定样品中待测的含量。
ELISA试剂盒的用法包括以下步骤:1.包被:用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml,酶标板中每孔加入50μl,室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤:弃包被液(拍干,再用无尘纸吸干),用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次(每孔均要加满),每次3min~5min。3.封闭:每孔加封闭液(1%BSA)250μl,37℃封闭2h。4.洗涤:用1×PBST洗涤液洗板3次,每次3min~5min。5.加样:加入已经稀释好的样品,37℃反应1h。一般样本加入50-100μl,充分混匀。6.洗涤:用洗涤液洗板3次,每次3min~5min。7.加入酶标试剂:每孔加入100μl酶标溶液,37℃,1h。8.洗涤:用洗涤液洗板3次,每次3min~5min。9.显色:每孔先加入显色剂A液50μl,再加入显色剂B液50μl,37℃避光10-15min。10.终止及测定:加入50μl终止液,终止反应,用酶标仪在450nm波长处测OD值。
ELISA测定结果如何计算.ELISA测定结果计算如下:1.计算阴性对照A值的平均数(NCX )和阳性对照A值的平均数(PCX)。2.两个平均数的差(P-N)大于一个特定的数值,例如0.400,试验才有效。3.3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范围,则弃去,而已另两个阴性对照重新计算NCX;如有两个阴性对照A值超出以上范围,则该次实验无效。4.阳性判定值按下式计算:阳性判定值=NCX+0.05。5.标本A值>阳性判定值的为阳性,小于阳性判定值的为阴性。需要注意的是,试剂盒的常数只适合于该特定条件下,而不是对各种试剂均可通用。
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