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人二氢嘧啶酶样2(DPYSL2)ELISA试剂盒灵敏度高

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人嘧啶酶样2(DPYSL2)ELISA试剂盒 灵敏度高



ELISA的基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或仍保持其学活性,酶标记的抗原或既保留其学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的或抗原)与固相载体表面的抗原或起反应。用洗涤的使固相载体上形成的抗原复合物与中的其他分开。再加入酶标记的抗原或,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了反应的结果,使测定达到很高的度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定。






组成结构:



1、 :操作中避免任何细胞。使用不含热原和的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。


2、 :EDTA柠檬酸盐肝素可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。


3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。


4、 组织匀浆:将组织加入适量盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。


5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。


此IBL试剂盒能用于小鼠,EDTA,细胞上清中白介素-6的定量检测


试剂盒成分


1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T


2 酶标记: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1


3 品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2


4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1


5 标记稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1


6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1


7 终止液: 1N 12mL x 1


8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记和显色剂)


ELISA90分钟一步法的优点主要包括:1.操作简单:该只需要一步操作即可完成,操作简单明了,易于。2.快速:ELISA90分钟一步法可以在短时间内完成,适合于大批量样品的快速检测。3.特高:该采用特定的或抗原进行固定和检测,因此具有较高的特。4.灵敏度高:ELISA90分钟一步法具有较高的灵敏度,可以检测出较低浓度的抗原或。5.重复性好:该的重复性,结果较为。6.安全性高:ELISA90分钟一步法不使用放射性同位素等有害,因此具有较高的安全性。需要注意的是,ELISA90分钟一步法也存在一些缺点,例如可能会受到非特因素的影响,结果不准确。此外,该的试剂成本较高,不适合于小规模样品的检测。



酶联吸附法(ELISA)的优点包括:1.高灵敏度:ELISA可以检测出微量的抗原或,其灵敏度通常比其他学更高。2.高特:ELISA仅与特定的抗原或结合,因此不易受到其他的,具有较高的特。3.快速:ELISA操作简便、快速,可以在短时间内结果.4.易操作:ELISA实验操作相对简单,易于化和自动化,因此适合于大规模样品的检测。5.应用范围广:ELISA可以用于检测多种生物分子,如蛋白质、多肽、等,因此在医学、生物领域广泛应用。6.无放射性核素污染:与放射测定法相比,ELISA不需要使用放射性核素,因此更为安全、环保。总之,ELISA是一种高灵敏度、高特、快速、易操作的学技术,具有广泛的应用前景。






人嘧啶酶样2(DPYSL2)ELISA试剂盒 灵敏度高



 



 



试验原理


试剂盒是固相夹心法酶联吸附实验(ELISA).已知浓度的、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。


自备材料


1. 蒸馏水。


2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。


3. 振荡器磁力搅拌器等。


安全性


1. 避免直接终止液和底物A、B。一旦到这些,请尽快用水冲洗。


2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。


3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。


4. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的品应丢弃,不可保存。


5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。


6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。


7. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。


8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。


9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。


10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光,避免长时间于光下。避免用手,有毒。实验完成后应立即读取OD值。


11. 加入试剂的顺序应一致,以所有反应板孔温育的时间一样。


12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。





人嘧啶酶样2(DPYSL2)ELISA试剂盒 灵敏度高




做好对照


正式试验时,应分别以阳性对照阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特反应,可采用羊、兔或BSA等封闭。


实验条件的选择


ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:


(1) 固相载体的选择:许多可作为固相载体,如聚氯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。


(2) 包被(或抗原)的选择:将(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。


(3) 酶标记工作浓度的选择:用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度)在正式实验里准确地滴定其工作浓度。


(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMBABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。





ELISA试剂盒检测中的注意事项




1、要移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。


2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后,要更换枪头。即使是吸取品时。


3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更。


4、实验时,要使底物避光保存。


5、用枪吸取时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。


6、吸取时,要用量程和需要量接近的枪去吸,误差。


7、将加到酶标孔中时,避免枪头和孔内,可使枪头上的液滴和孔壁,液滴会自然流下去。


8、全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。


9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。


10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去后,要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。


11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。


12、底物是光的,要在临用前现配。


13、检测前,要打开酶标仪,使之10分钟以上。


14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免。


15、待检样品要澄清,否则会影响结果。


16、温浴时间应遵守试剂盒规定。


17、应尽量做双孔实验,这样才能数据的准确性。


18、对结果有疑问的样品要用其它进行确证。







 

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