谷胱甘肽还原酶（GR）试剂盒紫外分光光度法

谷胱甘肽还原酶（GR）试剂盒紫外分光光度法说明书

紫外分光光度法 50管/48样  

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

商品属性：

产品名称：谷胱甘肽还原酶（GR）试剂盒紫外分光光度法

货号：LZ-S0127-A

规格 : 50管/48样

测试方法:紫外分光光度法

产品分类：辅酶Ⅱ系列

发货地：上海

测定意义:

GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，通常昆虫中GR被TrxR取代，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。

测定原理:

GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时不断消耗NADPH；通过测定NADPH减少量，即可测定GR活性。

实验中所需仪器及设备

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1ml石英比色皿、双蒸水

试剂的组成和配制:

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存。临用前加入 3 mL 蒸馏水，混匀。

试剂三：粉剂×2 支，-20℃保存。临用前加入 1.5 mL 蒸馏水，混匀。

生化检测试剂盒操作步骤：

一、‌准备工具和环境‌：确保操作台面干净、整洁，这是进行科学实验的步。

‌二、‌仔细阅读说明书‌：这是使用试剂盒的基础，说明书包含了所有必要的信息和操作指南。

三、样本采集‌：按照说明书的指导，正确采集样本。不同类型的检测可能需要不同类型的样本，如血液、唾液或鼻涕等。

‌四、样本混合‌：将样本与试剂小心混合，注意轻柔操作，避免产生泡沫，以确保检测的准确性。

‌五、‌等待反应‌：混合后，耐心等待试剂盒的反应，这个时间可以用来进行其他活动，但不要着急，因为好的结果值得等待。

六、结果判读‌：时间到后，仔细判读结果。试剂盒通常会有明确的指示，告诉你如何根据显示的线条或颜色来判断结果。 

NAD+和 NADH 的提取:

1 血清（浆）中 NAD+和 NADH 的提取NAD+的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 酸性提取液），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。NADH 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：碱性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 碱性提取液），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2 组织中 NAD+和 NADH 的提取：NAD+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1g组织，加入 1mL 酸性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

NADH 的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1g

组织，加入 1mL 碱性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3 细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取：NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 酸性提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。NADH 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱性提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 碱性提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

注意事项:

①加入试剂的顺序应一致,以所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。

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