人Ⅱ型肺泡上皮细胞

细胞名称: 人Ⅱ型肺泡上皮细胞

种属来源: 人

组织来源: 肺组织

疾病特征: 正常原代细胞

细胞形态: 上皮细胞样，多角形

生长特性: 贴壁生长

培养基: 我们推荐使用EliteCell原代上皮细胞培养体系

作为体外培养原代 II型肺泡上皮细胞的培养基。

生长条件: 气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37  ℃, 

传代方法: 1：2至1：6，每周2次。

冻存条件: 90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存

细胞鉴定: 肺表面活性蛋白 A（SP-A）或肺表面活性蛋白 C（SP-C）荧光染色为阳性，经鉴定细胞纯度90%。

QC检测:     不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

人Ⅱ型肺泡上皮细胞特点和简介

Ⅱ型肺泡细胞（ATⅡ）又称颗粒肺泡细胞，散在分布于ATⅠ肺泡细胞（ATⅠ）之间及其相邻的肺泡间隔结合处。其体积较小，呈立方形，表面稍突向肺泡腔。细胞核大而圆，胞质染色较浅淡，胞质中常见空泡。数量较ATⅠ多，ATⅡ占肺泡上皮细胞总数的14%到16%，但仅覆盖5℅的肺泡表面。ATⅡ体积比ATⅠ小很多，人约为900um3 .在细胞游离面有较多的短微绒毛，尤其在细胞边缘部更多。细胞表面有 MPA凝集素，对α-半乳糖残基有特异性反应。相邻细胞以紧密连接或中间连接相连，胞质内有较多的线粒体和粗面内质网，还有多泡体、溶酶体和板层体[1]。ATⅡ是肺泡上皮细胞的“干细胞”，它的功能多样：能增殖成新的ATⅡ，还可以分化为其他上细胞如ATⅠ；合成和分泌表面活性物质的功能；肺水转运功能；强大的功能。这些功能与以下疾病有密不可分的关系。

人Ⅱ型肺泡上皮细胞接受后处理

1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。

4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

人Ⅱ型肺泡上皮细胞培养操作

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。