牛转铁蛋白(TRF)ELISA试剂盒
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≥ 1盒¥2400.00
牛转铁蛋白(TRF)ELISA试剂盒
试剂盒性能
1. 特高:由于是抗原的特结合,因此试验的特很高,能够排除其他的。
2. 灵敏度高:由于酶的放大作用,使得试验的灵敏度大大,能够检测出微量的抗原或。
3. 操作简便:ELISA试验操作相对简单,容易,适合于大规模样本检测。
4. 适用范围广:可以用于检测各种抗原、和等生物分子。
样品收集、处理及保存
1. :使用不含热原和内的试管,操作中避免任何细胞,收集血液后,3000 转离心 10 分钟将和红细胞迅速小心地分离。
2. :EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。
辣根过氧化物酶:过氧化物酶(HRP)广泛分布于植物中,辣根中含,从辣根中提取的称辣根过氧化物酶(HRP),是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白(含糖量18%),分子量约40 000,约由300个酸组成,等电点为pH 3-9,催化反应的适pH值因供氢体不同而稍有差异,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的铵溶液。酶蛋白和辅基吸收光谱分别为275nm和403nm。
实验原理
试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验(ELISA)。往预先包被相关指标的的包被微孔中,依次加入标本、品、HRP标记的检测,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
牛转铁蛋白(TRF)ELISA试剂盒
操作步骤
1)涂层:微孔板的孔涂上捕获或抗原。
2)封闭:孔内加入封闭剂(如牛白蛋白或羧纤维素),非特蛋
白质结合。
3)样本添加:加入含有未知浓度的目标抗原或的样本。
4)洗涤:去除未结合的。
5)检测添加:加入对特定抗原有特的酶标记检测。
6) 再次洗涤:再次去除未结合的检测。
7)底物添加:加入酶的底物,酶作用于底物产生颜色变化。
8)终止反应:加入终止溶液停止酶的反应(在某些类型的ELISA中需要)。
9) 读数:使用光谱光度计测定每个孔的吸光度(通常是在特定波长下),吸光度
与样本中抗原或的浓度成正比。
操作步骤:1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃。2. 设置品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;品孔各加不同浓度的品 50μL;3. 待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40μL;4. 随后品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测 50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。5. 弃去,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗 板 5 次(也可用洗板机洗板)。6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。7. 所有孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
标本的采集及保存
1.:全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3.细胞物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 (注:标本溶血会影响**检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。)
结果分析
根据试剂盒提供的品浓度及对应的OD值,利用品绘制的曲线,计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理,通过计算待测样品的浓度。
免责声明
试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或生物体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担, 本公司概不负责。
严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。