产品介绍:
产品名称:羌活染料法PCR鉴定试剂盒
英文名称:Rhizoma et radix notopterygii
产品货号:LZ-P2476
规格:50T
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光。
有效期:一年
如何进行 PCR 实验?
一、羌活染料法PCR准备实验材料(1)上海DNA模板:包含你想要复制的DNA区域。(2)引物:短的单链DNA片段,用于指导DNA合成的起始位置。(3)DNA聚合酶:一种酶,用于合成DNA。(4)四种脱氧核苷酸(dNTPs):DNA的构建块。(5)缓冲液:提供适宜的反应环境。(6)镁离子或其它必需的离子:通常作为DNA聚合酶的辅助因子。 二、设定反应混合物将所有材料混合在微量离心管中。混合物的总体积通常在20-50微升之间。
3. PCR程序(1)将混合物放入PCR机(热循环仪)中,并设定程序。PCR程序通常包括以下阶段:(2)初次变性:加热至94-98°C,持续几分钟,使DNA双链解开成单链。(3)循环步骤(通常进行30-40次循环):(4)变性阶段:加热至94-98°C,持续20-30秒,使DNA双链解开。(5)退火阶段:降温至50-65°C,持续20-40秒,允许引物与模板DNA结合。(6)延伸阶段:加热至72°C,持续1分钟每1千个碱基,以便DNA聚合酶合成新的DNA链。(7)后延伸:在72°C下持续5-10分钟,确保所有可用的DNA模板都被复制。(8)保持阶段:将温度降至4-15°C,直到用户准备取出样品。
实验步骤:
一.样品制备
1.PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测,上样量3-5ul。PCR产物为10ng/nl左右为佳。
2.PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ul SSCP上样缓冲液(变性缓冲液,同《分子克隆》中的测序缓冲液),然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验,扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就适当增加1.5、2或3不等,同时加大上样缓冲液的量,比如加3ul的PCR产物,缓冲液加到8ul变性效果更好。
3.羌活染料法试剂盒PCR产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR仪上95℃变性10分钟,立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min,以免变性的产物复性。
小鼠白细胞弹性蛋白酶抑制因子(LEI)PCR检测试剂盒 , LEI ELISA Kit
人锚蛋白(ankyrin)ELISA检测试剂盒HumanankyrinELISAKit
大鼠抗心肌抗体(AMA)试剂盒 Rat Ai-myocardial aibody,AMA ELISA Kit
英文名称RatLHELISAKit大鼠促黄体激素(LH)
细胞膜蛋白萃取试剂盒20次
ELISAKitESA人上皮特异性抗原规格:48T/96T
人热休克蛋白40(HSP-40)ELISA
小鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)试剂盒 Mouse platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB ELISA Kit
绿脓杆菌(PA)试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
HumanPulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-APCR检测试剂盒人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)PCR检测试剂盒
ELISAKitAChRab小鼠乙酰胆碱受体抗体规格:48T/96T
HumanCobravenomneuronalprotectivefactor,CVNPFELISAKit人神经保护因子(CVNPF)PCR检测试剂盒
羌活染料法PCR鉴定试剂盒Beta1-adrenergic receptor 能受体β1(抗原)Multi-class antibodies规格: 0.5mg
Anti-Phospho-Beta-Catenin (Thr41/Ser45) 0酸化β 连环素蛋白抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh PCDHGA8 原钙粘蛋白γA8抗体 规格 0.2ml
IL10RB Kit Human 人 IL10RB / CRFB4 ELISA配对抗体 ELISA
phospho-Tau protein(Ser733) 英文名称: 0酸化微管相关蛋白抗体 0.1ml
CRX1 英文名称: CRX抗体 0.1ml
Anti-Phospho-Beta-Catenin (Thr41/Ser45) 0酸化β 连环素蛋白抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
PCR实验的基本步骤:
DNA聚合酶是实验室中常用的生物学酶之一,在PCR实验中具有重要的作用。实验室常用的DNA聚合酶,包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。
一、Taq聚合酶:
Taq聚合酶是由Thermus aquaticus细菌产生的一种DNA聚合酶,在分子生物学研究中得到广泛应用。Taq聚合酶具有热稳定性,可以在高温条件下保持活性,这是由于其来源于热液生物,能够存活和正常活动于高温环境。这使得Taq聚合酶在聚合酶链式反应(PCR)中起到关键的作用。Taq聚合酶能够按照DNA模板合成新的DNA链,因此在PCR中用于扩增目标DNA片段。然而,Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性,导致其生成的PCR产物末端容易出现额外的腺嘌呤碱基。因此,在某些应用中,需要使用具有外切酶活性的聚合酶。
二、Pfu聚合酶:
PCR法Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶相比,Pfu聚合酶具有更高的热稳定性和耐酶性。这使得Pfu聚合酶在高温PCR反应中表现出色,其高度稳定的酶活性能够确保PCR反应的可靠性和准确性。此外,Pfu聚合酶还具有3'-5'外切酶活性,可以修复并纠正PCR反应中的腺嘌呤碱基误配,有效防止误差累积。因此,Pfu聚合酶适用于需要高度准确的PCR扩增和DNA测序。
三、Tth聚合酶:
Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同,Tth聚合酶具有热活性反转转录酶活性,可以将RNA模板合成相应的DNA链。因此,Tth聚合酶在逆转录PCR(RT-PCR)中得到广泛应用,用于将RNA转录成DNA,并通过增加热活性酶来实现PCR扩增。此外,Tth聚合酶还具有一定的外切酶活性,可用于修复和校正PCR产物的末端。