转氢酶1试剂盒紫外分光光度法

转氢酶1试剂盒紫外分光光度法说明书

紫外分光光度法 50管/48样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品名称：转氢酶1试剂盒紫外分光光度法

货号：LZ-S01136-A

规格 : 50管/48样

测试方法:紫外分光光度法

产品分类：氧化磷酸化系列

发货地 ：上海

测定意义：

TH位于线粒体的内膜上，又称为呼吸电子传递链复合体六，催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互转化。催化正向反应称为TH-1。线粒体NADH含量增加时会导致线粒体膜的H+电化学梯度升高，因而促进了电子传递链上ROS的产生。TH-1促进NADH转换为NADPH，从而提高线粒体的抗氧化能力。

测定原理：

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸（APADP+）替代NADP+，TH-1催化 APADP+还原生成的APADPH在375nm有特征光吸收，因此通过测定375nm光吸收增加速率，来计算TH-1活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 50mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂二：液体 25mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂三：液体 25mL×2 瓶，4℃保存；

试剂四：粉剂×2 支，-20℃保存；

试剂五：粉剂×2 支，-20℃保存；

样本的前处理：

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：

① 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细菌或细胞，加入 1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

② 将匀浆 600g，4℃离心 5min。

③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。

④ 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的 TH-1（此步可选做）。

⑤ 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 500uL 试剂二，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于 TH-1 活性测定。

操作步骤:

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样,不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温度的水浴箱。天津

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。

公司正在出售的产品：

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生化检测试剂盒常见问题：

在使用生化检测试剂盒时，可能会遇到一系列常见问题，这些问题主要涉及到试剂盒的使用、保存、有效期、样本处理以及实验操作等方面。

以下是一些常见的问题及其解决方法：

一、‌测定原理‌：生化试剂盒通过化学反应或酶促反应测定样本中物质的含量或酶活性。常用的仪器包括分光光度计和酶标仪，它们的测定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等样本均可进行测定‌。

‌二、选择不同规格的试剂盒‌：根据实验的实际情况选择合适的试剂盒。如果实验室有酶标仪且具备检测波长，可以选择微量法试剂盒；如果有分光光度计及相应规格的比色皿，则可以选择常量法或微量法试剂盒。建议购买前仔细阅读说明书，确认自备的仪器和试剂是否符合要求‌。

‌三、保存方法‌：收到试剂盒后，如果暂时不用，应按照外包装上指示的温度保存。拆开包装后，应按照每个试剂的保存温度进行保存，注意有些试剂忌反复冻融，有些粉剂溶解后性质不稳定‌。

四、‌有效期‌：一般生化试剂盒的有效期为6个月，也有特殊货号的有效期为1年。具体以实际收到货物的标签信息为准‌1。

‌五、样本处理‌：新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数指标的测定，但有些生理活性物质容易降解，建议使用新鲜样本测定。对于冷冻样本，建议在-70℃或液氮中保存。样本在不同温度下的保存时间有所不同，例如4℃可保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存3个月‌。

‌六、土壤酶活性测定‌：对于土壤酶活性的测定，建议将鲜土风干并过筛后取样，以测定的重复性。若使用鲜土测定，需样本的颗粒大小一致且水分含量相似‌。

七、‌预测定‌：在进行正式测定前，建议选择2-3个预期结果差别较大的样本做预实验。通过预测定可以全面反映样品特点、试剂质量、仪器设备稳定性和操作规范性，确保正式测定结果真实可靠‌。