兔CCAAT增强子结合蛋白ε(C/EBPε)ELISA试剂盒
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≥ 1盒¥2400.00
仅供研究使用
兔CCAAT增强子结合蛋白ε(C/EBPε)ELISA试剂盒
酶联吸附法(ELISA)在多个行业都有应用,特别是在医学和生物技术领域中了广泛应用。以下是一些应用ELISA的行业:1.医学诊断:ELISA被广泛应用于各种和等的诊断,如、、结核病等。在动物检疫方面,ELISA已为广泛采用的,例如用于诊断猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪、蓝舌病等。2.生物技术研发:ELISA可以用于检测生物分子,如蛋白质、多肽、等,在生物医学研究领域广泛应用。例如,在研发中,ELISA可以用于检测的生物活性、与靶点的结合情况等。3.食品安全检测:ELISA可以用于检测食品中的有害,如残留、兽药残留等,保障食品安全。4.监测:ELISA可以用于评估水质、空气等指标,监测状况。总之,酶联吸附法在医学、生物技术、食品安全和监测等领域都有广泛的应用价值。
ELISA试剂盒的操作步骤如下:1.包被:用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml,酶标板中每孔加入50μl,室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤:弃包被液(拍干,再用无尘纸吸干),用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次(每孔均要加满),每次3min~5min。3.封闭:每孔加封闭液(1%BSA)250μl,37℃封闭2h。4.洗涤:用1×PBST洗涤液洗板3次,每次3min~5min。5.结合一抗:用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检,每孔100μl,要设立阴性对照,37℃孵育1.5h。6.洗涤:同上。7.结合酶标二抗:每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP(稀释倍数根据产品不同有所不同,可按说明书进行)50μl,37℃孵育1h.8.洗涤:同上。9.显色:每孔加底物溶液(TMB)50μl,置室温避光显色10min。10.待显色后,每孔加入50μl终止液(2mol/L H2SO4)终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值,以确定水平。以上步骤仅供参考,具体操作请根据实际情况和产品说明书进行。
试剂盒操作步骤:
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样:分别设空白孔、孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。 为实验结果有效性,每次实验请使用新的品溶液。
2.弃去,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记工作液 100μl(取1μl生物素标记加99μl生物素标记稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用小时内配制),37℃,60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记工作液) 100μl,37℃,60分钟。
5.温育60分钟后,弃去孔内,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时可见品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。
兔CCAAT增强子结合蛋白ε(C/EBPε)ELISA试剂盒
ELISA试剂盒的实验原理.ELISA试剂盒的实验原理是建立在抗原与学反应的基础上的,同时结合了酶的催化作用。其基本原理包括三个方面:1.抗原或能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其学活性。2.抗原或可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其学和酶学活性。3.酶结合物与相应抗原或结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。ELISA法一方面是建立在抗原与学反应的基础上,因而具有特。而另一方面又由于酶标记抗原或是酶分子与抗原或分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的性。因此,ELISA法是一种既又特异的。
标本的采集及保存:
:全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
细胞物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 (注:标本溶血会影响**检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。)
标本的稀释原则:通过文献检索的了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的中,应做好详细的记录。计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
生物素标记的稀释原则:临用前以生物素标记稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记加990μl生物素标记稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用小时内配制
注意事项:
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2.洗涤非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,建议使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做曲线,做复孔。
5.如标本中待测含量过高,请先稀释后再测定,计算时请乘以稀释倍数。
6.在配制品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
试剂盒性能
1.准确性:品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2.灵敏度检测浓度小于10 pg/ml。
3.特:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:批内与批见应分别小于9%和15%。