鸡VIII型胶原α1(COL8α1)ELISA试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

鸡VIII型胶原α1(COL8α1)ELISA试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被白蛋白（ALB）的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的白蛋白（ALB）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

操作注意事项：1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为 0 的品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作.5. 所有组分使用前充分摇匀。6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

本试剂盒采用双夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被捕获的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。

样品收集、处理及保存

1.  ：使用不含热原和内的试管，操作中避免任何细胞，收集血液后，3000转离心10分钟将和红细胞迅速小心地分离。

2.  ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

辣根过氧化物酶：过氧化物酶（HRP）广泛分布于植物中，辣根中含，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的铵溶液。酶蛋白和辅基吸收光谱分别为275nm和403nm。

鸡VIII型胶原α1(COL8α1)ELISA试剂盒

 

操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为0的S0号品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有组分使用前充分摇匀。

试剂的

 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板

1.  手工洗板：甩尽孔内，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

 

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置品孔和样本孔，品孔各加不同浓度的品50μL；

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

双夹心：本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病（IBDV）的双夹心ELISA为例介绍本法的操作程序。① 加包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干③ 加酶标 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液　→ 37℃ 15分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

 

试剂盒性能

1.  准确性：品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度检测浓度小于1.0 mg/mL。

3.  特：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6个月

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。