兔高敏C-反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒
-
≥ 1盒¥2400.00
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
兔高敏C-反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验(ELISA)。往预先包被白蛋白(ALB)的包被微孔中,依次加入标本、品、HRP标记的检测,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的白蛋白(ALB)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
自从Engvall和Perlman(1971)报道建立酶联吸附试验(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA)以来,由于ELISA具有快速、、简便、易于化等优点,使其迅速的发展和广泛应用。尽管早期的ELISA由于特不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐,但随着的不断改进、材料的不断更新,尤其是采用基因工程制备包被抗原,采用针对某一抗原表位的单克隆进行ELISA试验,都大大了ELISA的特,加之电脑化程度的ELISA检测仪的使用,使ELISA更为简便实用和化,从而使其成为广泛应用的检测之一。如今ELISA已被广泛应用于多种和等的诊断。在动物检疫方面,ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的。
布ELISA:(C-ELISA) C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大学者Blais,B. W.等于1989年建立的一种新型检测技术。该是以疏水性聚脂布(Hydrophobic Polyester Cloth)即涤纶布为固相载体,这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大,可为反应提供较大的表面积,反应的性,且容易洗涤,不需特殊仪器等优点。其基本原理与Dot-ELISA类似,只是载体不同。以对布氏杆菌抗原的检测为例,C-ELISA的主要程序为:⑴ 把抗布氏杆菌的包被(吸附)在聚脂布上,并经洗涤及封闭;⑵ 加被检样品并于室温下感作30分钟,然后洗5次;⑶ 加酶标记的抗布氏杆菌,于室温下感作30分钟,然后洗涤5次;⑷ 加入底物液显色;⑸ 测定OD值。
样品收集、处理及保存
1. :使用不含热原和内的试管,操作中避免任何细胞,收集血液后,3000转离心10分钟将和红细胞迅速小心地分离。
2. :EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪(450nm)
2. 加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项:1. 试剂盒保存在 2-8℃,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。3. 浓度为 0 的品可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍,终结果乘以5才是样本终浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作.5. 所有组分使用前充分摇匀。6. 若中英文说明书有误,请以中文说明书为准。7. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 1:20 稀释,即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。8. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有组分使用前充分摇匀。
试剂的
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板
1. 手工洗板:甩尽孔内,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置品孔和样本孔,品孔各加不同浓度的品50μL;
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制曲线:在Excel工作表中,以品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒性能
1. 准确性:品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度检测浓度小于1.0 mg/mL。
3. 特:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。