河南周口仪器校准机构第三方校验检测机构

、设备简介

PE EnVision 2105 多标记微孔板检测系统，主要用于在微孔板上进行光吸收、化学发光、荧光、时间分辨荧光、AlphaScreen以及荧光偏振等所有非放射性标记技术检测，具备的灵敏度、稳定性、和检测速度。

、设备参数与优势

EnVision多标记微孔板检测仪是目前检测速度快的高通量检测仪之一，所有检测技术都是模块化设计，用户可根据需要自由选取适合的检测模块，如以后有新的应用需求和通量要求，可以在用户实验室进行现场升级。作为行业的产品，在光路设计和附件配置方面均有到之处，为用户提供更灵敏、更快速、更灵活的检测体验。

1. 标记物特异的滤光片/二向色镜模块

EnVision多标记检测仪采用滤光片/二向色镜模块光路，其优势是把激发光和发射光完全分离开，避免了检测时的信号干扰，检测的准确性。所有滤光片/二向色镜均配备条形码，软件可自动识别，避免了手动选取光学元件时出错的可能性。

2. 四光栅检测光路

激发和发射均采用双光栅技术，在检测灵敏度的同时大大降低背景信号，可进行所用光吸收和荧光检测。具有全波长扫描功能，可确定待测物质的吸收峰值或荧光激发及发射峰值；具有很大的检测灵活性。

EnVision的滤光片/二向色镜与四光栅混合光路能大限度的兼顾检测灵敏度和灵活性，并提供快的速度和高通量。

3. 低背景的双检测器

EnVision的顶部检测光路采用全透镜模式，不借助光导器或是光纤束，检测速度更快、灵敏度更高。两个温度恒定的红敏光电倍增管（PMT）检测器满足FRET、LANCE、BRET、双报告基因等双发射同时检测分析的要求。

4. 超敏感化学发光

采用的检测器更靠近样品，立的光路设计有效避免相邻样本在检测时的交叉干扰，仅需更少的细胞就能获得比标准化学发光更高的灵敏度，使原代细胞、干细胞或难转染细胞的检测也不再困难。



5. 温度控制

温度控制覆盖整板区域，其范围是室温+2℃至50℃，并且在微孔板顶部有一加热部件，可有效防止冷凝问题。另外有针对AlphaScreen检测的温控模块，AlphaScreen检测过程的稳定性。
6. AlphaScreen

采用680nm激光源，立光路，立的PMT检测器，激发孔的同时检测后一孔，大大提高读板速度，实现高通量检测。

、设备应用

蛋白/核酸定量检测

1. 蛋白质定量

Lowrry法——蛋白质中含有酚基的酪氨酸，可与酚试剂中的磷钼钨酸作用产生蓝色化合物，颜色深浅与蛋白含量成正比，在650nm处检测吸光值，根据标准曲线计算样品浓度。

Bradford法——蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。

BCA法——BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一起即成为苹果绿，即BCA工作试剂。在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu2+还原为Cu+，一个Cu+螯合二个BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，在562nm处检测，大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
2. 核酸定量
PicoGreen染料能特异的与双链DNA（dsDNA）结合，OliGreen能特异的结合寡核苷酸（ssDNA）；双链λDNA或核苷酸溶于10 mM Tris-HCl（1 mM EDTA，pH 7.5）缓冲液，分别加入荧光染料，在激发光485nm、发射光530nm条件下检测荧光信号，核酸浓度和荧光强度成正比。


代谢研究

包括NADH检测、碱性磷酸酶、蛋白酶活性、双报告基因检测、细胞色素P450基因表达等。

1. 碱性磷酸酶检测

碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）广泛分布于机体各脏器器官中，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团去除，并生成磷酸根离子和自由的羟基，参与各种生化反应。BBTP是一种非荧光物质，当碱性磷酸酶去除其磷酸基团，得到的产物BBT可发出很强的荧光信号；因此，BBTP可作为底物检测碱性磷酸酶活性。检测灵敏度可达0.5 pg/孔（3 amol/孔）。

2. 双报告基因检测

报告基因是用来检测药物作用后细胞内相关蛋白表达水平或转录活性的变化的方法。双报告基因实验系统中，报告基因表达活力的相对改变与偶联调控启动子转录活力的改变相关，偶联到组成型启动子的第二个报告基因，提供转录活力的内对照， 使测试不被实验条件变化所干扰。本实验采用萤火虫荧光素酶，结合β-半乳糖苷酶（β-Gal）的双报告基因系统。先在微孔板中加入20µl样本溶液，再加入50µl荧光素试剂和50µl ATP，用检测仪检测1s，读取化学发光信号。然后在微孔板中加入100µl β-Gal底物，孵育15min后，于570nm检测吸光度。化学发光信号值与荧光素酶活性成正比，同时β-Gal变化趋势应与荧光素酶一致。

细胞周期、细胞毒性、细胞凋亡方面的研究
包括细胞活力、氧应激反应、细胞粘连、钙离子检测、CYP介导的药物代谢、ATP检测、蛋白质羟基化、Caspase-3检测等。

1. 细胞活力检测——MTT法

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

2. CYP介导的药物代谢

细胞色素P450（CYP）是药物代谢过程中的关键酶，药物先导分子能否被CYP酶代谢、哪种CYP参与代谢以及先导分子是否会抑制CYP的形成，这些问题对于药物ADME筛选至关重要。实验通过荧光检测快速筛选能抑制CYP2A5形成的先导分子；从小鼠肝脏微粒体获取有活性的CYP2A5，香豆素作为底物能特异的被CYP2A5代谢。反应开始前在微孔板中加入NADPH，37℃孵育10分钟，以60µl 10%TCA终止反应，再加入140µl甘氨酸-NaOH溶液（pH 10.4）增强荧光信号，在355nm激发光和460nm发射光条件下检测代谢产物7-OH-香豆素的含量。先导分子对CYP2A5活性抑制作用越强，则检测到的荧光信号越弱。
3. ATP检测
三磷酸腺苷（ATP）是活细胞的能量储存单元，在细胞中的含量比较稳定，因此ATP的数量与活细胞数量有紧密的相关性。ATP检测常用于细胞增殖、细胞毒性和细胞粘附研究。实验时，在微孔板中加入25µl样本和25µl细胞裂解液，应用分液器每孔加入50µl荧光素酶试剂，延迟1s，检测10s；ATP浓度与化学发光信号成正比，由此推算细胞活性。
4. Caspase-3检测
凋亡是在不产生应答反应的情况下，多细胞生物体清除损伤细胞的一种方式。半胱氨酸酶被称为Caspase，在细胞凋亡初期扮演着重要角色，药物有可能激活或抑制Caspase的产生。因此，在药物研发和癌症研究中，Caspase及其调控机制备受瞩目。PerkinElmer公司开发了一种LANCE方法检测Caspase-3的活性；其原理是，在Caspase-3的四肽底物一端标记Eu，另一端偶联能淬灭Eu荧光的基团QSY™7，当样本表现Caspase-3活性时，四肽底物上淬灭基团被切除，游离的Eu激发后发出荧光，通过荧光强度检测，可计算样本中Caspase-3的含量。此方法无需洗板，快速、灵敏、高信噪比，稳定性、重复性好。

信号通路、GPCR研究

TR-FRET/LANCE检测GPCR信号通路第二信使cAMP：标记Eu的cAMP与携带ULight的抗体结合形成共振能量转移对，当内源性的cAMP释放后可以竞争结合其抗体，从而破坏荧光信号的传递，通过检测665/615信号的改变，检测内源cAMP的含量。LANCE检测方法与传统ELISA方法相比，均相免洗、操作步骤简单、具有更高的检测灵敏度和信噪比。

横河eja压力变送器的校准需要用一台标准压力源输入变送器,因为不使用标准器而调量程(LRV、URV汴是校准，忽略输入部分(输入变送器的压力)来进行输出调节(变送器的转换电路)不是正确的校准。


再者压力、差压检测部件与A/D转换电路、电流输出的关系并不对等，校准的目的就是找准三者的变化关系。此外，只有对输入和输出(输入变送器的压力、A/D转换电路、环路电流输出电路)一齐调试， 才是真正意义上的校准。


横河eja压力变送器的压力源通过胶皮管与自制接头相连接，关闭平衡阀门，并检查气路密封情况，然后把电流表(电压表)、手操器接入变送器输出电路中，通电预热后开始校准。


对差压变送器进行校准时，先把三阀组的正、负阀门关闭，打开平衡阀门，然后旋松排气、排液阀或旋塞放空，然后用自制的接头来代替接正压室的排气、排液阀或旋塞；而负压室则保持旋松状态，使其通大气。一、目的：

当变送器在使用过程中遭遇进水后，应根据现场变送器被侵蚀的具体情况进行判断，是否可以继续使用。以下主要说明在此种情况下的检查步骤，以助尽快得出结论，恢复生产。



二、检查步骤：

1）先判断变送器进水情况

一般可能存在的几种可能：

A）前腔体（显视屏侧）进水

B）后腔体（接线端子侧）进水

C）容室法兰（引压侧）内进入泥沙2）从安装位置拆下变送器

先确认变送器供电电源已断电，然后打开后盖，如果有积水，须清理干净。

再拆下变送器接线端子的连线。

拆下引压管或安装法兰后，将变送器从安装位置取下。



3）在校验室进行具体检查

A）前腔体（显视屏侧）进水，将积水清除，返回工厂检查。

B）后腔体（接线端子侧）进水，先将积水清除，在确认前腔体没有进水的情况下，通电检查显示、电流等，无异常时检查通讯，有条件，加压合格，可以继续使用。

C）容室法兰内进入泥沙，可用水小心清洗，确保清理干净后加压，合格，可继续使用。

温湿度计计量检定时采用常温下、荫凉、冷冻及其净化车间的温湿度规定不一致，以净化车间应用的温湿度计为例子，GMP规定是温度18℃~26℃、湿度 45%~65%，可是计量检定单位计量检定的情况下是不容易有所差异的，复检的情况下公司能够向计量检定部门建议不一样应用自然环境的温湿度重要检测点关键计量检定。

温湿度计仪器设备校准准备工作：将规范器的摄像头放置恒温恒湿箱个人工作室的管理中心部位，被检仪器设备放置 恒温恒湿箱个人工作室的合理室内空间内，置放的方法与总数应不危害箱里气体循环系统。恒温恒湿箱的个人工作室应确保密封性，且不可置放湿冷或强吸水性原材料。

1.温度校准：温度示值误差校准：校准点应分布均匀在全部检测范围上，不可低于三点。校准箱的温度做到预设值后，应再平稳 30min 后逐渐读数，读熟规范器，后读 被检仪器设备，间距 5min 后反复读数一次。取2次读数的算数平均值为规范器和被检仪器设备的温度量程。

2. 被检仪器设备在各校准点上的温度示值误差均应合乎本规程 5.1 的要求。

3. 湿度校准：湿度示值误差校准：按照从低温干燥到高低温的次序开展校准，校准点应分布均匀在全部检测范围上（一般先后为 40%RH，60%RH，80%RH），不可低于三点。湿度校准时，箱里温度控制精度在 20℃，恒温恒湿箱的湿度做到预设值后，应再平稳 30min 后逐渐读数，读熟规范器，后读被检仪器设备，间距 5min 后反复读数一次。取2次读数的 算数平均值为规范器和被检仪器设备的相对性湿度量程。

4.被检仪器设备在各校准点上的湿度示值误差均应合乎本规程 5.1 的要求。

5.温湿度校准可另外开展。被校仪器设备读数均以看着方法开展。针对指南针仪器设备， 视野应垂直平分内径量表。温湿度计校准与计量检定，温湿度校检结果都是有一个误差指数，以规范45％为例子，被检温湿度计测到的结果可能是43％，也是有可能是47％，自然这两个结果也没有超出要求的差值范畴，该温湿度计全是达标的，可是若没有考虑到误差指数，测到47％的那只温湿度计放到净化车间内应用，当它读数为45％或是46％的情况下，工业厂房内的湿度肯定是小于45％的，因此这只温湿度计在净化车间内检测的湿度低限应当设定为47％，而不是45％，同样别的的检测关键环节也应当考虑到误差指数，温湿度计每一次计量检定结果都需要依据应用自然环境和每一次计量检定结果开展计算设置一个检测上低限，来更的体现检测的结果。

不需要校准设备的判定标准

并不是所有的设备都需要进行校准。

判断设备不需要校准的标准：

1）判断设备的使用用途；

例如，一些辅助设备不需要校准，比如破碎机。

2）设备应用于不同的测量方法时对结果的影响程度；

例如环境温度对润滑油黏度测试的结果影响很小，此时监控房间温度的温度计无需校准。

3）设备校准带来的贡献对测量结果总的不确定度影响程度；

例如对结果不确定度贡献值＜10%的设备，不需要进行校准。

4）是否为用于直接测量看数据结果的设备；

例如实验室用的放大镜不需要校准。ISO/IEC 17025:2017的6.4.6规定：

在下列情况下，测量设备应进行校准：

—当测量准确度或测量不确定度影响报告结果的有效性；和（或）

—为建立报告结果的计量溯源性，要求对设备进行校准。

RB/T 214-2017中4.4.3规定：

检验检测机构检验检测结果、抽样结果的准确性或有效性有影响或计量溯源性有要求的设备，包括用于测量环境条件等辅助测量设备有计划地实施检定或校准。某PH计使用单位审核时被提出如下问题：PH计需要三点校正，2点是不够的。那么用7.00、4.01做的校正，如果再需要第三点是该用9.21的缓冲液还是用10.01,9.18,12.46,1.68等其他的哪个缓冲液呢?该如何确定?
1、pH采第三点校正是多少，主要还是取决于你的样品情况。正如上文所说，校准溶液从pH1.68~12.46有许多种，根据样品终PH值范围决定选用合适的校准溶液。我们常用的是4.00，6.86，9.18，如果你的样品更偏近于碱性，则需要9.18、10.01、12.46。校正顺序根据不同仪器情况也各有区别，有的要求按顺序校准，有的则没有要求，仪器会自动识别，需要参见相关仪器使用说明书。



2、不管是什么样的pH计，pH=7这个点是校正的，而且在两点校正的时候要先校正pH=7这个点。

做校正时从7.0开始，选择的标准液与要测定的溶液的PH值有关，使溶液的PH值能落在校正的PH范围内。一般采用两点就可以满足要求，如果对其要求很高，才考虑第三点的。有些仪器能校正三点，有模式可选，可直接用该模式。有些没有的，一般是采用两点两点校对，即校对两次。



3、我们通常用的是7，4，10的校准次序。先校酸后校碱。

那么闲置了很久的PH计，而且电极也没放在保护液里，要怎样活化电极以及校正?需要注意些什么?标准校正液要怎么配?使用PH计要注意些什么细节呢?1、pH玻璃电极的贮存

短期：贮存在pH=4的缓冲溶液中；
长期：贮存在pH=7的缓冲溶液中。

2、pH玻璃电极的清洗

玻璃电极球泡受污染可能使电极响应时间加长。可用CCl4或皂液揩去污物，然后浸入蒸馏水一昼夜后继续使用。污染严重时，可用5%HF溶液浸10～20分钟，立即用水冲洗干净，然后浸入0.1N HCl溶液一昼夜后继续使用。

3、玻璃电极老化的处理

玻璃电极的老化与胶层结构渐进变化有关。旧电极响应迟缓，膜电阻高，斜率低。用氢氟酸浸蚀掉外层胶层，经常能改善电极性能。若能用此法定期清除内外层胶层，则电极的寿命几乎是无限的。

4、参比电极的贮存

银-氯化银电极好的贮存液是饱和氯化钾溶液,高浓度氯化钾溶液可以防止氯化银在液接界处沉淀，并维持液接界处于工作状态。此方法也适用于复合电极的贮存。

5、参比电极的再生

参比电极发生的问题绝大多数是由液接界堵塞引起的，可用下列方法解决：
(1)浸泡液接界：用10%饱和氯化钾溶液和90%蒸馏水的混合液，加热至60～70℃，将电极浸入约5cm，浸泡20分钟至1小时。此法可溶去电极端部的结晶。

(2)氨浸泡：当液接界被氯化银堵塞时可用浓氨水浸除。具体方法是将电极内充洗净，液放空后浸入氨水中10～20分钟，但不要让氨水进入电极内部。取出电极用蒸馏水洗净，重新加入内充液后继续使用。

(3)真空方法：将软管套住参比电极液接界，使用水流吸气泵，抽吸部分内充液穿过液接界，除去机械堵塞物。

(4)煮沸液接界：银-氯化银参比电极的液接界浸入沸水中10～20秒。注意，下一次煮沸前，应将电极冷却到室温。

(5)当以上方法均无效时，可采用砂纸研磨的机械方法去除堵塞。此法可能会使研磨下的砂粒塞入液接界。造成性堵塞。1、pH计使用

（1）将电极从电极保护液中取出冲洗干净，用无尘纸吸干后置于待测溶液中(待测液一定要没过电极泡)，按开机键打开pH计，pH计自动进入测定界面，然后按“measure save/print”键，等待读数稳定后即可读数。

（2）pH计使用完后，将电极冲洗干净用无尘纸吸干，充分浸泡电极保护液中。电极保护液要及时更换，一星期更换一次。

2、pH计的校准

（1）将pH值分别为4.01，7.00，10.01的标准缓冲液转移到洁净干燥的50mL小烧杯中。

（2）按开机键打开pH计，将电极冲洗干净用无尘纸吸干后置于pH为4.01的标准缓冲液中。按“calibrate”键到CAL.1界面，等待读数稳定且读数前面的光标闪烁时，按“数字编辑”键，调节pH计读数到标准液的pH值。接着按“calibrate”键进入CAL.2界面。

（3）将电极冲洗干净用无尘纸吸干后置于pH为7.00的标准缓冲液中，等待读数稳定且读数前面的光标闪烁时，按“数字编辑”键，调节pH计读数到标准液的pH值。然后按“calibrate”键进入CAL.3界面。

（4） 将电极冲洗干净用无尘纸吸干后置于pH为10.01的标准缓冲液中，等待读数稳定且读数前面的光标闪烁时，按“数字编辑”键，调节pH计读数到标准液的pH值。

（5）按“measure save/print”键保存校正结果，得出三点校准后的直线斜率。若直线斜率在100±3范围内，且测定另外两个标准缓冲液的pH值在±0.3的范围内，则此次校准有效。否则需重新校准。

（6）使用完标准缓冲液后用封口膜密封放在干燥的地方，以备多次使用。
当所测的溶液pH值在小范围内时(如3-8)，可以只用pH为4.01和7.00的两种标准缓冲液校准。
校准完成后，若pH计使用频繁，每2天校准一次。
如遇到下列情况，pH计需要重新校准：
a.电极在空气中暴露过久，如半小时以上时。
b.测量过酸(pH<2)或过碱(ph>12)的溶液后。
c.换过电极后。



注意


1、电极不用时，充分浸泡电极保护液中。电极保护液要及时更换，一星期更换一次。切忌用洗涤液或其他吸水性试剂浸洗或浸泡在纯水中。

2、测量浓度较大的溶液时，尽量缩短测量时间，用后仔细清洗，防止被测液粘附在电极上而污染电极。

3、清洗电极后，不要用无尘纸擦拭玻璃膜，而应用无尘纸吸干, 避免损坏玻璃薄膜、防止交叉污染，影响测量精度。

4、测量中注意电极的银—氯化银内参比电极应浸入到球泡内氯化物缓冲溶液中，当外参比液少于1/3时，应及时添加，避免电极显示部分出现数字乱跳现象。使用时，注意将电极轻轻甩几下。

5、电极不能用于强酸、强碱或其他腐蚀性溶液。

6、严禁在脱水性介质如无水乙醇、重铬酸钾等中使用。

7、pH标准缓冲液应密封保存在干燥的地方。

8、转移出来的标准缓冲液盛在洁净干燥的容器中，每次校准时要将电极冲洗干净并用无尘纸吸干， 防止标准缓冲液被污染稀释，使用完标准缓冲液后用封口膜密封放在干燥的地方，以备多次使用。当发现转移出来的标准缓冲溶液有浑浊、发霉或沉淀等现象时，不能继续使用。

由于各品牌pH计的操作略有不同，具体操作及维护指南请参见品牌推荐的方式。电极种类繁多，可针对样品选择合适的电极，本文仅针对普通玻璃电极做简单的介绍。

1、内部校准和自校准的区别

“自校准”一般是利用测量设备自带的校准程序或功能(比如智能仪器的开机自校准程序)或设备厂商提供的没有溯源证书的标准样品进行的校准活动，通常情况下，其不是有效的量值溯源活动，但特殊领域另有规定除外。

“内部校准”是指在实验室或其所在组织内部实施的，使用自有的设施和测量标准，校准结果仅用于内部需要，为实现获认可的检测活动相关的测量设备的量值溯源而实施的校准。

因此符合要求的内部校准是CNAS认可的溯源途径，而自校准不是。



2、内部校准适用范围

对于取得CNAS认可的检测实验室，或准备申请CNAS认可的检测实验室，与其获得或申请的认可能力有关的测量设备，如果量值溯源是通过内部校准的途径，则满足CNAS－CL31∶2011《内部校准要求》。

但是如果实验室与其获得或申请的认可能力有关的测量设备内部校准能力，已获得CNAS校准实验室认可或取得法定计量检定机构授权的，则可以认为能满足《内部校准要求》而不需再按CNAS－CL31∶2011《内部校准要求》进行评审。例如有的实验室玻璃量器比较多，如果全部送检，费用大且周期长，影响了检测工作，该实验室向省级计量行政主管部门申请建标并且通过考核，取得了玻璃量器的计量标准考核证书，则可以认为该实验室对玻璃量器的内部校准是符合CNAS要求的量值溯源途径。相关法规规定属于强制检定管理的测量设备，应按规定检定，不能进行内部校准。



3、对人员的要求

从事内部校准的人员应有相应的物理、数学知识，计量学知识及测量不确定度的评定能力。内部校准的人员，应经过相关计量知识、校准技能等必要的培训、考核合格并持证或经授权。



4、对环境条件和设施的要求

实验室实施内部校准的校准环境、设施应满足校准方法的要求。

应确保其环境条件不会使结果无效，或对所要求的校准质量产生不良影响。

对影响内部校准结果的设施和环境条件的技术要求应制定成文件。

当内部校准方法有要求，或对结果的质量有影响时，实验室应监测、控制和记录环境条件。当环境条件危及到内部校准的结果时，应停止校准。



5、对内部校准所用设备及参考标准的要求

实施内部校准应按照校准方法要求配置和使用参考标准和/或标准物质(计量标准)以及辅助设备，其量值溯源应满足CNAS－CL01《检测和校准实验室能力认可准则》第5.6条“测量溯源性”的要求和CNAS－CL06《量值溯源要求》的要求。为确保校准的正确性和可靠性，对参考标准和/或标准物质(计量标准)的建立、考核、维护和正确使用应制定的程序。

应按照规定的程序和日程对参考标准和/或标准物质(计量标准)进行核查，以保持其校准状态的置信度。

参考标准和/或标准物质(计量标准)应进行测量不确定度验证、重复性考核和稳定性考核。



6、对校准方法的要求

计量设备的内部校准方法应采用国家校准规范或部门校准规范，在没有校准规范的情况下，等同采用相应的国家检定规程或部门检定规程。

在没有相应的校准规范或检定规程或其他标准方法时，实验室可以使用自编方法、测量设备制造商推荐的方法等非标方法，使用测量设备制造商推荐的方法时应转化为实验室文件。非标方法应进行方法确认，保存方法确认的记录。



7、内部校准的质量控制

实验室的质量控制程序、质量监督计划应覆盖内部校准活动。参考标准和/或标准物质(计量标准)应参加CNAS承认的实验室间的比对或测量审核或能力验证计划。



8、不确定度要求

实验室应对开展的全部内部校准项目(参数)评估测量不确定度，应在校准证书或记录中报告测量不确定度和(或)给出对其计量规范或相应条款的符合性声明。一般情况下，校准结果应包括测量结果的数值y和其扩展不确定度U。应在校准证书中注明不确定度的包含因子和包含概率，可以使用以下文字描述:“本报告中给出的扩展不确定度是由标准不确定度乘以包含概率约为95%时的包含因子k。”扩展不确定度的数值应不超过两位有效数字，并且应满足以下要求:

1) 终报告的测量结果的末位，应与扩展不确定度的末位对齐;

2) 应根据GB/T8170《数值修约规则与极限数值的表示和判定》的规则进行数值修约。在校准证书中报告测量不确定度的来源时，应包含校准期间短期的不确定度分量。



9、内部校准的记录及报告

内部校准的校准证书可以简化，或不出具校准证书，但校准记录的内容应符合校准方法和认可准则的要求。校准记录应有较长的保存期，以监视被校准测量设备的稳定性。

校准人员的校准结果经过校核人员的核验。校准记录中应包含所用计量标准名称及其性编号，以确保校准过程的复现。



10、内部校准在CNAS认可活动中的要求

在初审、复评和扩项评审时，如果申请认可的检测能力存在内部校准活动时，实验室在申请书中申报，CNAS将安排相关校准领域的评审员，参加现场评审，评审结果实验室内部校准能力不符合要求时，申请认可的相关检测项目或参数不予认可。

如果实验室存在内部校准活动，但申请时未报的，现场评审中，评审组内无相关内部校准的评审能力时，申请认可的相关检测项目或参数不予认可。监督评审中，应覆盖内部校准活动，一般情况下，内部校准能力的覆盖范围与认可的检测能力的监督范围一致。内部校准的结果只能在实验室内部使用，不能对外宣称内部校准项目获得CNAS认可或使用认可标识。

网络分析仪是否可以不校准？

不校准直接测试，这是网络分析仪的降档使用方法，不校准状态比校准后的误差可能大10倍以上，可以用来临时观察评估，不可用作正式测量报告数据。

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校准件配套数据的必要性

的配套数据是校准件价值所在，没有数据的校准件不能用来做校准。

矢量网络分析仪校准时，选定激活所使用的校准件配套的数据，不能不选，也不能选择不配套的其它数据，也不能选ideal理想值，否则导致校准错误。配套数据不准确，会导致的校准误差。

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什么是SOLT和TOSM校准？它们的区别？

两者是同样的校准技术。

SOLT是Keysight的叫法，Short - Open - Load - Through；

TOSM是R&S的叫法，Through - Open - Short - Match。

推荐称为TOSM，因为Load和Line的缩写都是L，可能产生混淆。

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正确TOSM校准基础要求？

✦ 校准件接口类型与DUT完全一致；

✦ Through - Open - Short - Match各个校准件的配套数据匹配，多项式模型或s1p数据均可；

✦ 在矢网Cal kit菜单中检查Through校准件数据，是否male-male, female - female以及male - female 三种类型齐备，而且通常male - female直通不需要物理器件，实际是测试电缆接口直接互联，Delay（或电长度）和loss等于零，其它两种直通这两项参数大于零，或者完整s2p数据；

✦ 在矢网Cal kit菜单中检查Through校准件数据，如果仅有THRU(m-f)，delay=0，而其它OSM校准件数据齐备，此套校准件不支持male-female以外的TOSM校准，如果是m-m或f-f的被测件测量，只能应用未知直通UOSM校准；

✦ 在矢网Cal kit菜单中检查Through校准件数据，如果THRU(m-f)的delay=0，那么即使校准箱中存在THRU(m-f)物理器件，也不能在TOSM校准值使用；

✦ 注意，可能在使用的校准箱中，发现有各种接口类型的直通连接器，但是Cal kit中没有配套数据，说明这仅仅是连接器，只能作为未知直通，不能用作THRU直通校准件。

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同轴校准常用方法？

✦ 双端口和多端口测试时，如果Through - Open - Short - Match各个校准件的配套数据完整且在校准周期内，推荐使用TOSM；

✦ 如果直通校准件没有的配套数据，推荐采用未知直通校准，SOLR是Keysight的叫法，UOSM是R&S的叫法，校准过程与TOSM类似，执行OSM校准步骤后，用一个普通同轴连接器代替THRU做未知直通校准；

✦ 单端口器件测试时，推荐OSM(OSL)校准。

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UOSM的"未知直通"连接器的要求？

未知直通连接器，实现测试界面之间的连接，与DUT接口类型一致，驻波没有特殊要求，损耗不大且满足互易性（S21=S12 >> -40dB）即可。

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校准件的配套数据类型格式？

校准件的配套数据，有两种类型，一种是多项式模型，另一种是S参数数据。

✦ 校准时采用配套的校准件数据，不可使用ideal理想数据；

✦ S参数数据类型，是校准件配套计量的S参数数据；

✦ 多项式模型，除了特性阻抗以外，一般给出Open的电容多项式系数、Short的电感多项式系数、Through的延时（单位ps）或电长度（单位mm），以及上述校准件的loss（GΩ/s或dB/√GHz）；

✦ 精密级校准件，每套校准件严格的出厂测试，配套计量的S参数数据类型，并且给出基于此数据的多项式模型；

✦ 经济型校准件一般都采用多项式模式的模式，而且每个型号的多项式系数都是一样的，无需出厂测试，产品线工艺误差，不确定度比精密级校准件差。

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测试同轴连接器的要求？

测试电缆末端连接器要求很高，随意使用的普通商用转接器无法精度要求。生产工艺和精度的原因，造成同轴内导体连接缝隙，造成阻抗不连续，反射驻波会恶化。另据计量学界对此连接缝隙的仿真研究，要求校准件有一定的缝隙避免出现谐振，且不同同轴类型和频率范围的连接器，要求的小缝隙尺寸不同。对于空气线校准件，为了两侧的对称性，尽量缝隙小化。

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快速查验网络分析仪是否故障

各端口不接电缆开路进行全频段波量测试，显示水平功率曲线，数值等于网络分析仪设置功率，起伏不超过2dB，说明状态完好；

曲线如果出现大的波峰波谷，说明网络分析仪故障。

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快速查验校准件故障方法？

以下是正常校准件的表现：

✦ 端口1分别直接连接Short - Open - Load（Match），S11扫频测试；

✦ Open和Short，S11幅度接近0dB，S11的delay与配套数据一致；

✦ Open的起始相位0°左右，Short的起始相位180°左右；

✦ 匹配负载的S11<-20dB，相位随机；

✦ Through连接端口1-2，观察测试S11≈S22<-20dB，S21≈S12且数值很小。

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如何校准同轴校准件的数据

✦ 初始检验校准件，包括特殊设计的精密空气线、精密负载和短路器，精密测试电缆和连接器；

✦ 矢量网络分析仪使用上述装置完成初始TRL校准后，对校准件进行测试获取S参数数据，作为配套数据。依据这些S参数进行曲线拟合运算，可以得到多项式模型系数数据。

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校准件的维护保养

✦ 校准件是精密校准器具，严防物理损伤，保持日常清洁防尘维护。另外注意日常使用中的磨损造成校准件数据的变化，使用一段时间需要重新校准，校准周期建议1年或500次连接，原厂和计量机构可以提供校准服务。

✦ 建议与生产企业签订保修、维修和校准服务合同，校准件用量大且频繁的用户需要注意，有些厂商规定拒绝单体校准件维修替换，整套购置，这种情况需考虑维护预案以避免损失。