鸡生长因子受体结合蛋白10(Grb10)ELISA试剂盒

鸡生长因子受体结合蛋白10(Grb10)ELISA试剂盒

实验原理

    ELISA运用了学原理和化学反应显色原理，需要将抗原或预包被在固相载体表面，使后来形成的抗原--酶 (荧光基团) -底物复合物黏附在载体上，通过检测OD值或发光值，来检测靶蛋白的含量。

ELISA试剂盒的用法包括以下步骤：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤：弃包被液（拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。5.加样：加入已经稀释好的样品，37℃反应1h。一般样本加入50-100μl，充分混匀。6.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。7.加入酶标试剂：每孔加入100μl酶标溶液，37℃，1h。8.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。9.显色：每孔先加入显色剂A液50μl，再加入显色剂B液50μl，37℃避光10-15min。10.终止及测定：加入50μl终止液，终止反应，用酶标仪在450nm波长处测OD值。

酶联吸附法（ELISA）的原理是利用抗原或与酶的结合，形成酶标抗原或，保持其活性，同时又保留酶的活性。将抗原或与酶连接成酶标记抗原或，它既保留了活性，又保留了酶的活性；在测定时，把受检标本(含待测或抗原)和酶标抗原或按一定程序与结合在固相载体表面的抗原或起反应形成固相化抗原-酶复合物，用洗涤的使固相载体上形成的抗原-酶复合物与其它成分分离，结合在固相载体上的酶量与标本中受检的量成一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被固相载体上的酶催化生为有色产物，通过定性或定量检测有色产物的量即可确定样品中待测的含量。

酶联吸附法（ELISA）是一种灵敏、特异的学技术，常用于医学、生物领域中的抗原或检测。其作用包括：1.诊断：ELISA可以用于检测或组织样本中的特定分子，如抗原、抗原、标志物等，协助进行诊断。2.检测：ELISA可以用于检测血液中的，如乙型表面、人类缺陷等，用于流行病学调查和临床诊断。3.评估：ELISA可以用于检测后的以及剂量对的化学反应等，帮助对患者进行个性化。4.生物分子检测：ELISA可以用于检测生物分子，如蛋白质、多肽、等，在生物医学研究领域广泛应用。总之，酶联吸附法在医学、生物领域中具有广泛的应用价值，是临床诊断和中重要的辅助手段。

ELISA测定结果如何计算.ELISA测定结果计算如下：1.计算阴性对照A值的平均数(NCX )和阳性对照A值的平均数(PCX)。2.两个平均数的差(P-N)大于一个特定的数值，例如0.400，试验才有效。3.3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而已另两个阴性对照重新计算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上范围，则该次实验无效。4.阳性判定值按下式计算：阳性判定值=NCX+0.05。5.标本A值>阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。需要注意的是，试剂盒的常数只适合于该特定条件下，而不是对各种试剂均可通用。

 操作步骤

1. 工作：将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟，使试剂盒恢复至室温。同时好实验所需的材料和。

2. 加样：在酶标板的弟1个孔中加入品50μL，然后在后续的孔中依次加入待测样本50μL。

3. 温育：将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。

4. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内。

5. 加酶：在每个孔中加入酶标物100μL。

6. 温育：再次将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。

7. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内。

8. 加底物：在每个孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。

9. 终止反应：在每个孔中加入终止液50μL。

10. 检测：用酶标仪在450nm波长下读取各孔的吸光度（OD值）。

鸡生长因子受体结合蛋白10(Grb10)ELISA试剂盒

结果分析

根据品和样本的OD值，绘制曲线，从而计算出样本中角蛋白1（KRT1）的浓度。具体分析可参剂盒说明书或相关文献。

注意事项

1. 在操作中，应保持酶标板的干燥，避免水分进入孔内。

2. 加样时需确保加样准确、无气泡产生。

3. 温育和洗涤中需严格控制时间和温度，确保实验结果的准确性。

4. 在使用酶标仪读取OD值时，需确保波长设置正确，避免误差产生。

5. 在整个实验中，需保持操作的清洁和整洁，避免交叉污染。