豌豆凝集素本生试剂盒

ELISA试剂盒为捕获抗体具有高亲和力、高特异性、低内毒素的单抗，研究者以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。ELISA试剂盒的原理是什么?
　　到目前为止，ELISA法仍在研究当中占有着主流地位，普遍应用使得实验更加方便、经济和准确， ELISPOT技术的优点也决定了它的发展潜力。LISPOT法来源于ELISA，相比较传统的ELISA法有所突破，是定量ELISA技术的延伸和发展。由于游离的循环抗体或CK的半哀期不同，使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合，传统的酶联吸附法(ELISA法)不能确切的反映体内的抗体及CK的水平。
　　ELISA试剂盒的原理包括了可以提了两款改良型siRNA用于活体转染。可以增加siRNA-转运试剂复合体的稳定性。而SIRNAPLUS则不需要转运试剂，其转运载体就整合在siRNA分子上。为了解决这一问题，公司开发了一个试剂盒，可以将shRNA插入到基因组的特定位置。这一靶向整合试剂盒采用锌指核酸酶技术，将 shRNAELISA试剂盒插入到人类基因组的AAVS1位点。这一技术将shRNA定位在一个地方，使影响shRNA表达水平的一个重要变量固定下来。
　　ELISA试剂盒普遍用作非放射性同位素的成键化验。在这种方法中，通常标准配体是固定的，通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键。通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体，而且一开始抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量。第二种抗体能识别抗体的末端，在其末端的碱性磷酸酯或过氧化物酶等与酶发生反应，从而使溶液显色。

Elisa试剂盒注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

影响ELISA试剂盒实验的因素
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性;
2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。
二、试验仪器
1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低;
2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。
三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低;
2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;
3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性;
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
5、抗原与抗体反应达到完全平衡，依赖于温度与时间。温度45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。

elisa试剂盒价格具有以下优点：
1)快速： 仅需传统夹心法ELISA 1/3的操作时间，1小时即可完成整个试验流程;
2)简单： 只需1个洗涤步骤;
3)灵活： 可单或同时检测总蛋白及磷酸化蛋白，可在同一板上检测不同的靶蛋白;
4)灵敏： 达到甚至超过行业标准，且结果一致性良好;
5)兼容： 常规比色法检测，实验室常规酶标仪读数;
ELISA试剂盒保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。
为什么ELISA反响总是需求一定时刻的温育?
ELISA属固相测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生，以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的时机，只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触，这是一个逐步平衡的进程，因而需经扩散才能到达反响的结尾。在这以后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。
温育常选用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。
37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度，在建立ELISA方法作反响动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1～2小时，产品的生成可达高峰。为加快反响，可进步反响的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为，在放射测定中多使反响在冰箱中过夜，以构成多的沉淀。但因所需时刻太长，在ELISA试剂盒中一般不予选用。
Elisa试剂盒有几种检测方法：
双抗体夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤;
6.’后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。