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传统中药,放射出奇异的光彩,堂,凭什么相信你的阿胶?

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堂 真金不怕火炼

阿胶是一传统的中药,自诞生之日起,勤劳智慧的劳动人民就用传统的生产工艺,靠传统的经验,生产传统的中药——阿胶;并靠言传身教、以师带徒的方式,传授技艺、总结经验、控制质量。几千年来人民逐步总结出了一套宝贵的制胶经验。业胶者靠传统的制胶经验,一代又一代地生产着国药瑰宝——阿胶。直至新中国成立后,随着社会的发展,科技的进步,标准的规范,阿胶也和其他中药一样走上了标准化发展的道路。
3000年来,山东道地阿胶始终名扬天下,靠的就是稳定的质量。
堂是怎么控制阿胶产品质量的呢?
堂为了提高产品质量,严格按照阿胶的法定标准来组织生产:同时,为了自已的产品特色和增加市场的竞争能力,还制定法定标准的内控标准来控制阿胶的质量,为此,才使得阿胶这个古老的传统中药,放射出奇异的光彩。
堂,凭什么相信你的阿胶?

1阿胶质量标准的规范过程

历史上阿胶的生产是以作坊式或个体互助合作的形式而进行的,各店户立经营,并相互保密,致使阿胶的组方和质量各异。同是阿胶,在东阿城就有福、禄、寿、财、喜等各种不同牌号的阿胶,但配方不一。
新中国成立后,卫生行政部门为加强对阿胶的管理,统一了阿胶的配方,规定所产的阿胶内一律不加药料,生产清胶,并以通知的形式下发了阿胶的质量标准,此为阿胶标准之始,_随着国家药品管理的逐步加强,1963年将阿胶收载于《人民共和国药典》,并规定了处方、制法、功能、主治、用量用法、贮藏六项。其后1977年、1985年、1990年、1995年、2000年各版《人民共和国药典》均有对阿胶的收载,并对阿胶的质量标准不断的补充和完善。至2000年版《人民共和国药典》阿胶项下规定了制法、性状、检查(水分、总灰分、重金属、砷盐、挥发性碱性物质、卫生制度检查)、炮制、性味与归经、功能与主治、用量与用法,贮藏八项13个项目指标。可以看出,各版药典对阿胶的质量标准都进行了不同程度的修改;阿胶质量标准也随着社会的进步、科技的发展,不断的补充、完善和提高。
1995年版《人民共和国药典》又将阿胶从原来的中药材管理纳入中药制剂管理,至此,阿胶的质量标准提高到一个新水平。
国家除了对阿胶的处方、性状、制法、检查等内容进行规范,制定了阿胶的质量标准,并收录于《人民共和国药典》外,还对阿胶的原料驴皮制定了质量标准,并于1995年收载于《山东省药材标准(1995年版)》中;2002年又将其修订完善收录入《山东省药材标准(2002年版)》,使阿胶的原料驴皮也走上了标准化管理的道路。
1985年7月1日,国家颁布实施《人民共和国药品管理法》,将阿胶的生产经营纳入了法制化管理。1988年始推行《药品生产质量管理规范》,1995年始实施GMP认证制度。2001年国家规定了药品的生产过程符合GMP要求,并将上述要求纳入了2001年12月1日颁布实施的新版《人民共和国药品管理法》.
从此阿胶的生产过程也要符合国家药品管理的要求。阿胶的生产经营,不仅产品质量指标要符合《人民共和国药典》的规定,生产过程也要符合GMP有关规定和药品管理法的要求。


阿胶的法定质量标准

标准来源:人民共和国药典2000年一部。
质量标准:阿胶质量标准阿胶项下规定了制法、性状、检查(水分、总灰分、重金属、砷盐、挥发性碱性物质、卫生学限度检查)、炮制.性味与归经、功能与主治、用量与用法、贮藏八项13个项目指标。
阿胶是质量稳定的特殊的产品,俗称“陈阿胶”,在21500多年的临床应用中,都以陈者为好。许多医家在运用中还特别强调以陈者入药,以去燥性。明末人卢之颐《本草乘雅半偈》:’亦须陈久者方堪入药。”四川省内江市东兴区物资局唐珙在“话阿胶”注意事项中强调“阿胶忌鲜品。新制胶陈放三年以上方可服用,否则将导致火气亢盛,引起口鼻生疮、目赤、喉痛,甚至便秘、便血”等。目前,山东东阿镇贮有60年以前生产的阿胶,除外观发生了变化,即碎裂外其余各项质量指标均符合要求。所以,阿胶在2001年以前的几千每的药用历史中一直没有制定有效期,也没有规定过“使用期限’。
2001年中国加入WTO后,为了与国际接轨,在2002年阿胶亦规定了有效期。按人民共和国药品管理法规定,在阿胶的生产经营活动中,应按照有效期的要求对阿胶进行管理。但是在消费者手中的阿胶,可根据情况掌握食用。贮存使用中,如果阿胶除了发生
物理形态的变化,即随着水分的逐步散失,胶片发生碎裂外,还没有霉变的话,还是可以继续使用的。因为阿胶的有效成分是胶原蛋白及其水解产物,在阿胶这一固体制剂中,性质是相当稳定的。


阿胶质量检验

1水分测定法

方法依据:《人民共和国药典(2000版一部)》附录=H水分测定法法(烘干法)。
仪器及设备:分析天平(万分之一),恒温水浴锅,恒温干燥箱,扁形称量瓶(40×25)毫米,干燥器。
试剂:变色硅胶,纯化水。
操作原理:在常压和规定温度下,用电热干燥箱将供试品平到踅重。
操作方法:取供试品1克,置干燥至恒重的扁形瓶中加水2毫升,盖上瓶:,置沸水浴上加热溶解。打开瓶盖,继续置水浴上蒸干,使厚度不超过3毫米。打开瓶盖,在100~105℃干燥5小时,将瓶盖盖好,移置干燥器中,冷却30分钟,精密称定重量。再在上述温度干燥l小时,冷却,称重,至连续两次称重的差异不超过5毫克为止。根据减失的重量,计算供试品中含水量(%)。
计算公式:
水分(%)一[(m1一m2)/(m。一mo)]×100%
式中:m0空称量瓶重(克);m1为干燥前称量瓶和供试品重(克); m2为干燥后称量瓶和供试品重(克)。
允许差:本法的相对偏差不得超过2%。
注意事项:干燥器中的变色硅在使用过程中,氧化后(如由蓝色变为粉红色),应将硅胶置105℃烘箱内烘2小时以上,至蓝色后,取出稍冷,放入干燥器中。在烘干过程中,经常观察烘箱温度。每个干燥器内放入称量瓶不得超过10个。称量瓶在干燥器的放置时间和顺序应与空称量瓶时一致。

2总灰分测定法

方法依据:《人民共和国药典(2000版一部)》附录IX K灰分测定法(总灰分测定法)。
仪器及设备:电阻炉,电炉子,干燥器,坩埚,瓷坩埚(25毫升),分析天平(万分之一)。
操作原理:供试品经高温烧至完全炭化,使有机质破坏分解变为可挥发性的物质而逸出,而残留的非挥发性无机杂质称为灰分。
操作方法:取供试品l克,置炽灼至恒重的坩埚中,称定重量(准确至0.Ol克),置于排风橱内电炉上,缓缓炽灼,注意避免燃烧,至完全炭化时,移入电阻炉,逐步升高温度至500~600℃,恒温2小时,使完全灰化,降温至300℃时取出,移入干燥器中,冷却30分钟称量。照前法再放入电阻炉中,恒温O.5小时,降温、冷却,反复至恒重。根据残渣重量,计算供试品中总灰分的含量(%)。
计算公式:
总灰分(%)一[(m2一m1)/ms]×100 %
式中:ms为供试品的重量(克);m2为灼后坩埚和残渣重量(克); m1为炽灼前空坩埚重量(克)。
允许差:本法的相对偏差不得超过3%。
注意事项:干燥器中的变色硅应保持有效状态。每次干燥器一次放入坩埚不得超过lO个。在电炉子上加热时,将坩埚放置石棉网上,坩埚在干燥器中每次放置时间应一致,否则易产生误差。在高温电阻炉外加热时,应注意缓缓加热,使供试品逐步炭化,避免供试品因骤温膨胀引起发泡外溢。


3重金属测定法

方法依据:《人民麸和国药典(2000版一部)》附录ⅨE重金属测定法第二法。
仪器及设备:钠氏比色管(50毫升),瓷坩埚(25毫升),水浴锅,吸管,比色架,量筒,胶头滴管,吸球。
试剂及溶液:硝盐酸,氨试液,酚酞指示液,醋酸盐缓冲液(pH3.5),硫代乙酰胺试液,标准铅溶液。
操作原理:硫化钠或硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解产生硫化氢,与供试品中重金属在实验条件下所显颜色,与一定量的标准铅溶液在同样操作条件下所显的颜色比较,检查供试品中重金属。
反应式:pb2+S2—phs
操作方法:
标准铅溶液的制备:称取酸铅O.160克,置1 000毫升曼瓶中,加硝酸5毫升与水50毫升溶解后,用水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。临用前,精密量取贮备液10毫升,置100毫升量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得(每毫升相当于10微克的Pb)。
标准铅斑的制备:精密量取标准铅溶液一定量,置小烧杯中,用水稀释成10毫升,加入醋酸盐缓冲溶液(pH3.5)2毫升与硫代乙酰胺试液1.o毫升,摇匀,放置10分钟,用50毫升注射器转移到上述滤器中进行压滤(滤速约每分钟1毫升),滤毕,取下滤膜,放在滤纸上千燥,即得。 .
检查法:取总灰分项下遗留的残渣,加硝酸O.5毫升,蒸干,至氧化氮蒸气除尽后,放冷,加盐酸2毫升,置水浴上蒸干后,加水15毫升,滴加氨试液至对酚酞指示液显中性,再加醋酸盐缓冲液(pH3。5)2毫升,微热溶解后,移置钠氏比色管中,加水稀释成25毫升;另取配制供试品溶液的试剂,置瓷皿中蒸干后,加醋酸缓冲液(pH3.5)2毫升与水15毫升,微热溶解后,移置钠氏比色管中,加标准铅一定量,再用水稀释成25毫升;再在样品和标准管中分别加硫代乙酰胺试液各2毫升,摇匀,放置2分钟,同置白纸上,自上向下透视,样品管显出的颜色与标准管相比不得更深。
注意事项:供试品与标准管应同时操作,按顺序加入试药。比色时如有必要应反复调换供试管和标准管的位置。然后进行观察比较。测定时要严格控制溶液的酸碱度。标准铅的储备液,使用期应不超过3个月。

4砷盐测定法

方法依据:《人民共和国药典(2000版一部)》附录Ix F砷盐测定法(古蔡氏法)。
仪器及设备:测砷瓶(100毫升磨口瓶),瓷坩埚,电阻炉,电炉子,干燥箱,移液管,水浴锅。
试剂及溶液:碘化钾试液,酸性氯化亚锡试液,溴化汞试纸,锌粒,标准砷溶液,氢氧化钙,盐酸。
操作原理:金属锌与酸作用产生新生态的氢,与供试品中微量亚砷盐酸作用,生成具挥发性的砷化氢,遇溴化汞试纸产生黄色至棕色砷斑,与标准砷斑比较,判定供试品中含砷的。
反应式…
AsO。一十3Zn+9H+一AsH3十+3}{20+3Zn2+。
AsH3+3}tgBr2—3HBr+.As(HgBr)3黄色
2As(HgBr)。+AsHa—,3AsH(}{gBr)2棕色
操作方法:
标准砷溶液的制备:称取三氧化二砷o.132克,置1 000毫升量瓶中,加20%氢氧化钠溶液5毫升溶解后,用适量的稀硫酸中和,再加稀硫酸10毫升,用水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。临用前,精密量取贮备液10毫升,置l 000毫升量瓶中,加稀硫酸10毫升,用水稀释至刻度,摇匀,即得(每毫升相当于1微克的As)。
标准砷斑的制备:精密量取标准砷溶液2毫升,置100毫升标准磨口瓶中,加盐酸5毫升与水21毫升,再加碘化钾试液5毫升与酸性氯化亚锡5滴,在室温放置10分钟后加锌粒2克,迅速放入测砷瓶中,立即密塞,并将测砷瓶置2-5…40℃水浴中,反应45分钟,取出溴化汞试纸即得o
检查法:取本品2.o克,加氢氧化钙1克,混合,加少量水搅匀。干燥后,先用小火烧灼使炭化。再在,5OO~600℃炽灼使完全灰化,放冷,加盐酸3毫升与适量的水使溶解成30毫升,分取溶液10毫升,加盐酸4毫升与水14毫升,置测砷瓶中,加碘化钾试液5毫升与酸性氯化亚锡5滴,在室温放置10分钟后加锌粒2克,迅速放入测砷瓶中,立即密塞,并将测砷瓶置25- 40℃水浴中,反应钓分钟,取出溴化汞试纸,将生成的砷斑与标准砷斑比较,不得更深。
注意事项:所用仪器和试液等照本法做空白试验检查,均不应生成砷斑,或至多生成仅可辨认的斑痕。制备标准砷斑或标准对照液,应与供试品检查同时进行。本法用锌粒应无砷,以能通_过一号筛的细粒为宜,如使用锌粒较大时,用蠡应酌情增加,反应时间亦应为1小时。


5挥发性碱性物质测定法

方法依据:《人民共和国药典2000版一部》附录ⅨLl氮测定法第二法(半微量法)-
仪器及设备:刻度吸管(5毫升,lo毫升),容量瓶(100毫升),半微量定氮器,分析天平(万分之一),三角瓶(100毫升)o。
试剂及溶液:1%氧化镁混悬液,2%硼酸溶液,甲基红(0.1 2,6)一溴甲酚绿(o.2%)指示液,乙醇液0.005摩尔/升硫酸滴定液。
操作原理:挥发性碱性物质是动物蛋白由于细菌及酶的作用使之腐败分解而产生的游离氨和挥发性羟胺、芳香胺类,如胺、尸胺、酪胺、色胺、吲哚等碱性含氮物质。此方法是利用弱碱剂氧化镁使碱性含氮物质游离,而被蒸馏出来。用2%硼酸吸收,用标准酸液滴定求得含量.
操作方法:取本品5克,精密称定,置100毫升量瓶中,加水使溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取5毫升,置凯氏烧瓶中,立刻加1%氧化镁混悬溶液5毫升,迅速密塞,通入水蒸气进行蒸馏,以2%硼酸溶液5毫升为接收液,加甲基红一溴甲酚绿混合指示液5滴,从滴出滴凝结水珠肘,蒸馏7分钟,将冷凝管尖提出液面,使蒸气继续冲洗约1分钟,用水淋洗后停止蒸馏。馏出液用0.005摩尔/升硫酸谪定液滴定至由蓝色变为灰紫色,并将滴定的结果用空白试验(空白和试品所得馏出液的容量应基本相同,70~75毫升)校正,即得。每毫升硫酸滴定液(o.005摩尔/升)相当于o。1401克的氮。
计算公式:
挥发性碱性物质(克/100克)=[(V。一V。)×F×o;1401]/[w×1000/100×5]×l00
式中:vl为滴定样品消耗硫酸的体积(毫升);V。为滴定空白消耗硫酸的体积(m1):F为硫酸的实际当量值/硫酸的理论当量值;
w为样品重(克)。
允许差:本法的相对偏差不得超过o.5%。
注意事项:称量准确,否则影响结果。氧化镁溶液摇匀后再吸。三角瓶用纯化水洗净再吸硼酸液。

6低装量检查法

方法依据:《人民共和国药典(2000版一部)》附录Ⅻc低装量检查法(重量法)。
仪器:分析天平。
操作方法:取供试品3‘盒,.除去外包装和胶块上玻璃纸或PV(:纸,分别精密称重,求出每盒阿胶的装量与平均装量,平均装量应不少于标示量。每盒阿胶的装量应不少于标示量的97%(注:阿胶标示装量为50~500克时)。如有t盒不符合规定,则另取3盒复试,应符合规定。

7微生物限度检查法(细菌、酵母菌、大肠杆菌检查法)

方法依据:《人民共和国药典(2000版一部)》附录ⅫC微生物限度检查法。

供试液、稀释液的制备,

供试液:取阿胶若干,捣碎,称取10克,再用研钵研细,转入250毫升灭菌锥形瓶中,加入稀释剂(o.9%无菌氯化钠或0.1摩尔/升无菌磷酸盐缓冲液)100毫升,置于45℃水浴中,振摇使溶,即成为1:10的供试液。
稀释液:o.9%无菌氯化钠溶液:取氯化钠9.O克,加水溶解使成1 000毫升,121℃灭菌20分钟。无菌磷酸盐缓冲液(p147.2):取磷酸氢二钠25.8克与磷酸二氢钠4.4克,加水稀释至1 000毫升·12l℃灭菌20分钟。

培养基制备

营养肉汤培养基:胨10克,氯化钠5克,肉浸液1 000毫升。取胨和氯化钠加入肉浸液内,微温溶解后。调pH为弱酸性,煮沸,滤清,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,灭菌。
营养琼脂培养基:照上述营养肉汤培养基的处方及制法,加入15~20克琼脂,调节pH值使灭菌后为7.2±o.2,分装,灭菌。
玫瑰红钠琼脂培养基:胨5克,葡萄糖10克,磷酸二氢钾l克,硫酸镁0.5克,玫瑰红钠0.0133克,琼脂15~20克,水.1 000毫升。除葡萄糖、玫瑰红钠外,取上述成分,混合,加热溶化后,滤过,加入葡萄糖、玫瑰红钠,分装,灭菌。
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD):胨10克,酵母浸媸粉5克,葡萄糖20克,琼脂15~20克,水1 000毫升。除葡萄糖外,取上述成分,混合,加热溶化后。滤过,加入葡萄糖。分装,灭菌。
胆盐乳糖培养基(BL):胨20克,乳糖5克,氯化钠5克,磷酸氧二钾4.0克,磷酸二氢钾1.3克,牛胆盐(或去氧胆酸钠O.5克),水l 000毫升。除乳糖、牛胆盐外,取上述成分,混合,加热使溶解,调pH值使灭菌后为7.4士o.2,煮沸,滤清,加入乳糖、牛胆盐,分装,灭菌。
曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB):营养琼脂培养基100毫升,20%乳糖溶液5毫升,曙红钠指示液2毫升,亚甲蓝指示液1.3~1.6毫升。取营养琼脂培养基,加热溶化后,放冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液,摇匀,倾注平皿。
麦康凯琼脂培养基(MacC):胨20克,乳糖10克,牛胆盐5克,氯化钠5克,l%中性红指示液3毫升,琼脂15~20克,水1 000毫升。除乳糖:指示液、牛胆盐及琼脂外,取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,冷至约60℃,倾注平皿。
4一甲基伞形酮葡萄糖苷酸(MUG)培养基:胨10克,硫酸铵5克,硫酸锰0.5毫克,硫酸锌0.5毫克,硫酸镁0.1克,氯化钠lO克,氯化钙50毫克,磷酸二氢钾o.9克,磷酸氢二钠(无水)6.2克,亚硫酸钠40毫克,去氧胆酸钠1克,MUG 75毫克,水1 000毫升。除MUG外,各成分溶于1 000毫升水中,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入MUG,溶解后,每管分装5毫升,115~C灭菌20分钟。
蛋白胨水培养基:胰蛋白胨10克‘,氯化钠5克,水1 000毫升。取上述成分,混合,加热溶化,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管,灭菌。
磷酸盐葡萄糖胨水培养基:胨7克,葡萄糖5克,磷酸氢二钾3.8克,水1 000毫升。取上述成分,混合,微热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±d.1,分装于小试管,121C~菌15分钟。
枸橼酸盐培养基:氯化钠5克,硫酸镁o.2克,磷酸氢二钾1.o克,磷酸二氧铵l克,枸橼酸钠(无水)2克,溴麝草酚蓝指示液20毫升,琼脂15"--20克,水1 000毫升0除指示液和琼脂外,取上述成分,混合,微热使溶解,调节pH值使灭菌后为6.9+0.1,加入琼脂,加热溶化,加入指示液,分装于小试管;灭菌,置成斜面。
注:所用琼脂应不含游离糖,用前用水浸泡冲洗。

细菌、霉菌与酵母菌检查法

平皿菌落计数法:取均匀供试液,进一步稀释成1:102.1:103等适宜的稀释级。分别取连续三级10倍稀释的供试液各1毫升,置直径约90毫米平皿中,再注入约45~C的培养基约15毫升,混匀,待凝固后,倒置培养,每稀释级应做2~3个平皿。
营养琼脂用于培养细菌计数,玫瑰红钠琼脂培养用于霉菌计数。在特殊情况下,前者同时点计霉菌、酵母菌菌落数,后者同时点计细菌菌落数。酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。
菌数测定阴性对照试验:取供试验用的稀释液各1毫升,置4个无菌平皿中,分别按细菌、霉菌计数用的培养基制备平板,培养,检查,不得长菌。
细菌培养时间为48小时,分别在24小时及48小时点计菌落数,一般以148小时菌落数为准。,霉菌、酵母菌培养时间为72小时,分别在48小时及72小时点计菌落数,一般以72小时菌落数为准。菌落如蔓延成片,不宜计数。
点计后,计算各稀释级的平均菌落数,按菌数报告规则报告菌数一
菌数报告规则:细菌宜选取平均菌落数在30~300之间的稀释级,霉菌宜选取平均菌落数在30~100之间的稀释级作为报告菌数计算的依据。如有1个稀释级在302-,300(30~IOG)~,将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告;如同时有2个稀释级在30一300(30--100)之间时,按下式计算两级比值:
比值:(稀释的平均菌落数×稀释倍数)/(低级稀释的平均菌落数X稀释倍数) 当比值≤2时,以两稀释级的均值报告;当比值>2时,.以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告;如同时有3个稀释级的平均菌落数均在30~300之间时,以后两个稀释级计算级间比值报高;如各稀释级的平均菌落数均不在30~300之间,以接近,30或300‘的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告;如各稀释倍:数的平均菌落数均在300(100)以上,按高稀释级平均菌落数乘以稀释倍数告;如各稀释级平均菌落数均小于30时,一般按低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。如当l:10(或1:100)~级平均菌落数等于或大于原液(1:10)稀释级时,应以培养基稀释法测定,按测定结果振告菌数。
培养基稀释法:取供试液(原液或1:10,1:100供试液)’3份每份各1毫升,分别注入5个平皿内(每皿各0.2毫升)。每个平Ⅲ.倾注营舞琼脂培养基约15毫升,混匀,凝固后,倒置培养,计数。“餐毫升注入的5个平板的菌落数之和,即为每毫升的菌落数,共得3组。数据。以3份供试液菌落数的平均值乘以稀释倍数报告.
如各稀释级平板均无菌落生长,或仅低稀释级平均菌落数小于1时,则报告菌数为小于10个。

大肠杆菌检查法

增菌培养:取胆盐乳糖培养基3份,每份100毫升,2份分别加入规定量的供试液,其中1份加入对照菌50~100个作阳性对照,第3份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照。培养18~24小时(必要时可延至48小时。阴性对照应无菌生长。取上述3份的培养物各0.2毫升,分别接种至5毫升MuG培养基管内培养,分别于5小时与24小时,取未接种的MUG培养基管作本底对照,将各管置365纳米紫外线下观察。阳性对照管呈现荧光,MUG阳性。供试液的MUG管呈荧光,MuG阳性;无荧光,MuG阴性。然后加数滴靛基质试液于MUG管内,液面呈玫瑰红色为阳性,呈试剂本色为阴性。
当阴性对照呈阴性,阳性对照正常生长,供试液胆盐乳糖培养液澄明,并证明无菌生长,判未检出大肠杆菌。供试液MuG阳性,靛基质阳性,判检出大肠杆菌;MuG阴性,靛基质阴性,判未检出大肠杆菌。
IVic试验:如MuG阳性、靛基质阴性,或MUG阴性、靛基质阳性,均应取供试液胆盐乳糖培养物划线于曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂板,培养18~24小时,如上述供试液培养物的分离平板无菌落生长,判未检出大肠杆菌。或有菌落生长,应挑选2~3个可疑
菌落作靛基质试验(I)、甲基红试验(M)、乙酰甲基甲醇生成试验(V—P)、枸橼酸盐利用试验(C)及革兰染色、镜检,按表4—1规定判定结果。
靛基质试验(I):取可疑菌落或斜面培养物,接种于蛋白胨水培养基中,培养24小时,沿管壁加入靛基质试液数滴,液面呈玫瑰红色为阳性,呈试剂本色为阴性。
甲基红试验(M):取可疑菌落或斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中,培养48小时±2小时,于管内加入甲基红指示液数滴,立即观察,呈鲜红色或橘红色为阳性,呈黄色为阴性。
乙酰甲基甲醇生成试验(V—P):取可疑菌落或斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中,培养48小时±2小时,于每2毫升培养液中加入a一萘酚乙醇试液1毫升,混匀,再加40 %氢氧化钾溶液0.4毫升,充分振摇,在4小时内出现红色为阳性,无红色反应为阴性。
枸橼酸利用反应(c):取可疑菌落或斜面培养物,接种于枸橼酸盐培养基的斜面上,一般培养48~72小时,培养基斜面有菌生长,培养基由绿色变为蓝色时为阳性,培养基颜色无改变为阴性。
与MuG一1反应不符的可疑菌株,应重新分离培养,再作生化试验证实。
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