猫胰蛋白酶ELISA试剂盒_胰蛋白酶检测试剂盒
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猫胰蛋白酶ELISA试剂盒_胰蛋白酶检测试剂盒
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胰蛋白酶检测试剂盒 检验原理:
本试剂盒采用双抗体夹心酶联吸附试验(ELISA)。在预包被抗猫胰蛋白酶(Trypsin)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入猫胰蛋白酶(Trypsin)校准品和待测样本,再加入另一株HRP标记的抗猫胰蛋白酶(Trypsin)抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中猫胰蛋白酶(Trypsin)的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中猫胰蛋白酶(Trypsin)的浓度。
胰蛋白酶检测试剂盒 检测流程:
【试剂准备】
1、使用前,所有的组分都要至少复温30min,确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液:从冰箱取出的浓缩洗涤液,会有结晶产生,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水,按1:20稀释,即1份的浓缩洗涤液,添加19份的蒸馏水。
3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1体积充分混合,混合后15分钟内使用。
操作程序
1、所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。
2、按前面试剂准备中描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
3、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
4、设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,样本孔加待测样本50μL,空白孔不加。
5、除空白孔外,标准品孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。
6、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
7、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干。
8、如此重复4次(共洗板5次)。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。
9、将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育15min。
10、所有孔加入终止液50μL,在酶标仪上读取各孔吸光度(OD值)。
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