北京SCILOGEX赛洛捷克PCR仪售后维修中心

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赛洛捷克 PCR仪 TC1000-G 梯度PCR扩增仪 基因扩增仪：

TC1000-G 梯度PCR扩增仪

TC1000-G梯度PCR扩增仪具有升降温快速，控温度高，彩色触屏控制等特点，广泛应用于分子生物学，临床诊断，刑事侦查，疾病研究等。其梯度模块，拥有42℃的宽梯度功能，可实现不同退火温度的控制，仅一次实验就能确定特定体系相应的优退火温度。从而可在短时间内对PCR实验进行优化，提高PCR科研效率。
梯度PCR
性能指标：
• 温度控制，整个体系温度均一性好
• 快速的升降温速度，大程度降低PCR的非特异性扩增的发生率
• 彩色触屏，参数设定灵活，用户体验
•超宽42℃的梯度模块可设定不同的退火温度，一次实验即可优化PCR实验，提高科研效率
• 可调热盖高度，模块兼容性强，适合多种PCR反应管
• 体系，外形小巧，。

反应条件选择

PCR反应条件为温度、时间和循环次数。
温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因（长度为100～300bp时）可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸（此温度Taq DNA酶仍有较高的 催化活性）。
①变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的主要原因。一般情况下，93℃～94℃min足以使模板DNA变性，若低于93℃则需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。
②退火（复性）温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远模板 互补链之间的碰撞。 退火温度与时间，取决于引物的长度、 碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择适 退火温度的起点较为理想。引物的 复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度：
Tm值（解链温度）=4(G+C)+2(A+T)
复性温度=Tm值-(5～10℃）
在Tm值允许范围内， 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合， 提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。
③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性：
70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子
70℃ 60核苷酸/S/酶分子
55℃ 24核苷酸/S/酶分子
90℃时， DNA合成几乎不能进行。
PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够的。3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。

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