MEG-01传代培养细胞株技术硬

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有关实验室细胞培养基知识普及：
经典的培养基有很多种，Corning、Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。
MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。
BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。
aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。
Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。
RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。
干粉培养基：以前大部分实验室都是用干粉培养基，但配制过程就较为繁琐，要溶解、调pH值，过滤，过程中可能会产生一些浓度误差，而且有些实验室的水质并不理想，所以培养的效果会有差异。如果使用液体培养基，这种人为的误差会减少，因为毕竟是大批量工业化生产的，批间差会很小。大家是不是感觉液体培养基会贵很多，以前是这样，但现在大家都认同了。
无血清培养基(Serum-Free Media)，通常以SFM表示，顾名思义，就是在细胞培养中不需要添加血清，但是在某些应用中可能要添加生长因子或细胞因子。无血清培养基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等，能减少上述血清带来的不利因素，使细胞培养的条件更稳定。但它也不是的，从有血清培养过渡到无血清培养的条件并不像想象中那么直截了当。处于发育的不同分化阶段的细胞(例如干细胞与定向前体细胞相比)需要不同的配方，对生长因子和细胞因子的选择尤为重要。而且在去除血清的同时，也去除了一些血清蛋白具有的保护、作用，因此对试剂、水的纯度和仪器清洁度的要求更高。另外，它的价格也比普通的培养基贵很多。" "

细胞传代培养的胰酶消化法：
传代培养：是指细胞从一个培养瓶以1：2或1：2以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。
实验步骤：① 入无菌室之前用肥皂洗手，再用75% 的酒精擦拭消毒双手;
② 倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液37℃下预热。
③ 超净台台面应整洁，用75%酒精棉球擦拭清洁;
④ 打开超净工作台的紫外灯照射台面20min左右，关闭紫外灯，打开风机清洁空气除去臭氧;
⑤ 点燃酒精灯;取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。
⑥ 将培养用液瓶口用75%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
⑦ 倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去残留的就培养基，或用少量胰酶涮洗一下。
⑧ 每个大培养瓶加入1ml胰酶，小培养瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中。
⑨ 加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖，适度拧紧后稍回转，以利于CO2的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。
⑩ 对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。
注意事项
① 传代培养时注意无菌操作并防止细胞间的交叉污染。所有操作尽量靠近酒精灯火焰。每次好只进行一种细胞的操作。每种细胞使用一套器材。
② 每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
③ 如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果挽救，可加含有抗生素的BBS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗生素，并经常更换培养基。
传代细胞的建系和维持：细胞系的维持通过换液传代再换液、再传代和细胞种子冻存来实现。
对每一个细胞系来说都有其自身的特点，要做好建系的维持记录好细胞档案,换液传代和做好细胞系的管理工作。" "

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细胞培养相关培养基选购基本指南：
如何选择培养基：经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。为什么这样说呢?如果这种细胞是购自一些细胞库，那很简单，问供应商就行了。或者找到相关的文献，作为参考。
培养基这么多种，要选择起来也是个头疼的事情。除了部分培养基是公开配方的，或者是针对某一种细胞的，如昆虫基本培养基和神经祖细胞基础培养基， 但是大部分液体培养基都是专利配方的，也就是说其中的成分是保密的。那么你只能是检索文献、让供应商推荐，然后用自己的细胞做几次传代培养来选出合适的培养基。毕竟实践出真知。
怎么样才可以买到好的培养基产品：，当然需要找对品牌，其次是找对自己所在区域的品牌代理商，针对自己所养的细胞，咨询供应商该选用哪种的培养基进行培养，这样就可以买到好的而且适合自己的培养基产品。
关于培养基品牌，目前公司所知道的高校实验室有些同学在用Corning系列培养产品，也有同学在用Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)等品牌的产品。
培养基的选择和使用
MEM：成分简单，贴壁细胞。
DMEM：分高糖型和低糖型。
IDMEM：适合细胞密度低，生长困难的细胞。如杂交细胞的筛选，DNA转染后转化细胞的筛选培养。
RPM1640：应用广泛的培养基之一。悬浮细胞培养，主要针对淋巴细胞，也适合其他细胞。
199、109培养基：成分，培养效果较好。
F10培养基：适合小鼠及人类二倍体细胞培养。
F12培养基：适合单细胞分离培养及无血清培养。
McCoy’s5A培养基：特别适合原代细胞及较难培养细胞的生长。" "

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