禽流感病毒抗体（AIV）检测试剂盒（ELISA）

仅供科研使用，不得用于临床检验。

禽流感病毒抗体（AIV）检测试剂盒（ELISA）
说明书


货号：INS0030002






使用前，请务必仔细阅读说明书，如有不清楚的，请拨打24h技术支持专线：或/，咨询清楚再进行实验。




黄石市艾恩斯生物科技有限公司
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【产品名称】
通用名称：禽流感病毒抗体检测试剂盒（ELISA）
英文名称：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza Virus（ELISA）

【包装规格】
48T/盒，96T/盒

【预期用途】
本试剂用于检测禽血清中流感病毒抗体，可用于效果评价、辅助诊断等

【检验原理】
本试剂盒系由预包被禽流感病毒抗体抗原的酶标板（固相抗原，货号：INS0030002C）、抗体工作液（货号：INS0030002J）、酶标记物（酶标抗体，货号：INS0030002E）及其他配套试剂组成，应用竞争酶联法原理检测禽血清或血浆中禽流感病毒抗体。实验时在酶标板中加入稀释的待检血清和抗体工作液，若样品中含有禽流感病毒抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合，从而使后续反应不出现显色；反之则出现显色；显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有禽流感病毒抗体。

【主要组成成分】
主要成分
组分 数量 主要成分
阴性对照 1ml/管 不含待测物的缓冲液
阳性对照 1ml/管 含待测物的缓冲液
包被微孔板 96T 预包被固相抗原
酶标记物 10mL 酶标记的检测抗体
抗体工作液 6mL 抗体缓冲液
底物液A 6mL 过氧化脲工作液
底物液B 6mL TMB工作液
终止液 6mL 硫酸稀释液
20×浓缩洗涤液 30mL 含0.15%Tween20的PBS
说明书 1份 --
自封袋 1个 --
不干胶 2片 --
稀释板 1块 --
阴阳性对照已经通过测试，由于不存在一种试验方法能够完全没有这些物质，本品按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材
1、酶标仪
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
7、无粉一次性乳胶手套

【储存条件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为28天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】
半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。

【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
2、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
3、蛋黄：取2ml新鲜蛋黄加2ml生理盐水震荡混匀，3000转/分钟离心15分钟，取上清作为样本。
4、用工作洗涤液将待检血清、血浆或已处理蛋黄样本按5倍稀释（如10μl样本加入40μl工作洗涤液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

样本保存和稳定性
样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】
试剂准备
1、使用前，所有的组分都要至少复温2h，确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。

操作程序
1、所有试剂和组分都先恢复到室温，阴性/阳性对照和样品，建议做复孔。
2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
4、设置阴阳性对照孔、样本孔，阴阳性对照孔各加对照品50μL，样本孔加样本50μL。
5、每孔加抗体工作液50μl，混匀，置37℃反应30分钟。
6、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
7、所有孔加入辣根过氧化物酶标记物100μL。
8、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
8、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。
10、每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】
实验正常的情况下，阴性对照吸光值≥0.98，阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值×55%。

【检验结果的解释】
1.PI=（1-样本值/阴性对照孔均值）×100；
2.PI≥50为阳性；PI＜50为阴性。
【检验方法的局限性】
1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。
3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4、使用试剂盒配套的样品稀释液。
5、如果样本值高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。
6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。
7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

【产品性能指标】
1、物理性能
试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。
2、阴性结果
阴性对照的OD值0.98。
3、阳性结果
阳性对照的OD值低于阴性对照的OD值的55%。
4、特异性
本试剂盒识别天然和重组禽流感病毒抗体，与结构类似物无交叉。
5、稳定性
2℃-8℃保存，有效期6个月。

【注意事项】
生物安全
1、检测符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后洗手。

技术提示
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

废物处理
所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。

【基本信息】
企业名称：黄石市艾恩斯生物科技有限公司
生产地址：湖北省黄石市黄石港区磁湖路41号
固定电话：
网 址：
邮 箱：postmaster@

【说明书批准日期及修改日期】
批准日期：2013.05.12
次修改日期：2016.02.16