牛卵清蛋白特IgE(OVAsIgE)ELISA试剂盒
ELISA试剂盒的操作步骤如下:1.包被:用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml,酶标板中每孔加入50μl,室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤:弃包被液(拍干,再用无尘纸吸干),用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次(每孔均要加满),每次3min~5min。3.封闭:每孔加封闭液(1%BSA)250μl,37℃封闭2h。4.洗涤:用1×PBST洗涤液洗板3次,每次3min~5min。5.结合一抗:用1×PBST缓冲液1∶1000稀释被检,每孔100μl,要设立阴性对照,37℃孵育1.5h。6.洗涤:同上。7.结合酶标二抗:每孔加1×PBST缓冲液1000倍稀释的酶标二抗羊抗鼠IgG-HRP(稀释倍数根据产品不同有所不同,可按说明书进行)50μl,37℃孵育1h.8.洗涤:同上。9.显色:每孔加底物溶液(TMB)50μl,置室温避光显色10min。10.待显色后,每孔加入50μl终止液(2mol/L H2SO4)终止反应。使用酶标仪读取450nm的OD值,以确定水平。以上步骤仅供参考,具体操作请根据实际情况和产品说明书进行。
酶免ELISA试剂盒是一种常用的学实验技术,常用于抗原或的定量检测。这种试剂盒利用酶联吸附法(ELISA)技术,将已知的抗原或吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。ELISA试剂盒具有高灵敏度、高特、快速、易操作等优点,在医学、生物学和化学等领域广泛应用。
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标记
良好的酶结合物取决于两个条件:即价的和高活性的酶。的活性和纯度对制备标记至关重要,因为特反应随活性和纯度的而增强。在酶标记中,的活性有所,故需要纯度高、效及抗原亲和力强的球蛋白使用亲和层析提纯的,可性,而且可稀释使用,非特吸附。
酶与交联,常用法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记的改良过碘酸钠法简单易行,标记效果好,特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为:将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中,加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠(NaIO4)水溶液0.5ml,混匀置4℃冰箱30分钟 , 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,室温放置30分钟后加入含5g纯化的水溶液1ml,混匀并装透析袋,以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时(或过夜)使之结合,然后吸出,加(NaBH4)溶液(5(g/ml)0.2ml,置4℃冰箱2小时,将上述结合物混合液加入等体积饱和铵溶液,置4℃冰箱30分钟后离心,将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中,并对之透析过夜(4℃),次日离心除去不溶物,即酶标,用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml,进行测定后,冷冻干燥或低温保存。
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牛卵清蛋白特IgE(OVAsIgE)ELISA试剂盒
ELISA试剂盒用法
酶联吸附法(ELISA)的优点包括:1.高灵敏度:ELISA可以检测出微量的抗原或,其灵敏度通常比其他学更高。2.高特:ELISA仅与特定的抗原或结合,因此不易受到其他的,具有较高的特。3.快速:ELISA操作简便、快速,可以在短时间内结果.4.易操作:ELISA实验操作相对简单,易于化和自动化,因此适合于大规模样品的检测。5.应用范围广:ELISA可以用于检测多种生物分子,如蛋白质、多肽、等,因此在医学、生物领域广泛应用。6.无放射性核素污染:与放射测定法相比,ELISA不需要使用放射性核素,因此更为安全、环保。总之,ELISA是一种高灵敏度、高特、快速、易操作的学技术,具有广泛的应用前景。效果测定
测定内容包括酶和活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。
⑴ 酶与的活性 常用琼脂扩散或电泳法,使抗原与形成沉淀线,经PBS漂洗1天,再以蒸馏水浸泡1小时,将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色,如果出现应有的颜色反应,再用盐水浸泡,颜色仍然不褪,表示结合物既有酶的活性,也有活性。良好的结合物在显色后,琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定是用系列稀释的酶标直接以ELISA进行方阵滴定,此法不仅可以测定标记效果,还可以确定酶标的使用浓度。
⑵ 结合物的定量测定 一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定,然后按下列公式计算:
酶量(mg/ml)=OD403×0.42
IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.4)×0.94×0.62
对于过碘酸钠氧化法制备的标记量,按下列公式计算:
IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.34)×0.62
已知酶量和IgG量后,即可计算出标记的摩尔(mol)比值。
HRP/IgG摩尔比值=HRP(mg/ml)/IgG(mg/ml)×4
结合物中酶总量=HRP(mg/ml)×结合物溶液量
结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×
用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般,为500(g/ml时效果,达 1000(g/ml时效。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠,所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般,1.0时效果,1.5-2.0。酶结合率为 7%时效果一般,为9%-10%,达30%以上。
酶免ELISA试剂盒是一种常用的学实验技术,常用于抗原或的定量检测。这种试剂盒利用酶联吸附法(ELISA)技术,将已知的抗原或吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。ELISA试剂盒具有高灵敏度、高特、快速、易操作等优点,在医学、生物学和化学等领域广泛应用。
ELISA试剂盒适用行业ELISA试剂盒广泛应用于生命科学研究、临床医学和工业等领域。1.在生命科学研究领域,ELISA试剂盒可以用于检测细胞因子、、酶、等分子的含量和活性,用于学、学、分子生物学等研究领域。2.在临床医学诊断中,ELISA试剂盒可以用于检测中的标志物、、心肌酶等指标,用于临床诊断及监测。3.在食品安全检测中,ELISA试剂盒可以用于检测食品中的残留、残留等有害,用于食品检测和安全评估。4.在监测中,ELISA试剂盒可以用于检测中的化学、微生物等污染物,用于监测和污染治理。5.在动物防控中,ELISA试剂盒可以用于检测动物中的、抗原等指标,用于动物疫病防控和兽药残留检测。总之,ELISA试剂盒在许多行业中都有广泛的应用。